EB病毒DNA定量檢測在鼻咽癌診治中的研究及以分子標(biāo)記物預(yù)測、監(jiān)測鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)是我國常見的惡性腫瘤之一，尤在華南地區(qū)最常見。放射治療是鼻咽癌的主要治療手段，對局部晚期鼻咽癌，目前的標(biāo)準(zhǔn)治療是同期放、化療，但對遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的控制并不理想。目前的臨床分期系統(tǒng)尚未能有效地預(yù)測局部晚期患者接受同期放、化治療后是否仍有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，因此有必要尋找一項新的分子生物學(xué)指標(biāo)篩選易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的高?；颊撸笇?dǎo)臨床進(jìn)行最適宜的個體化的放、化綜合治療。EB病毒(Epste

2、in-Barrvirus,EBV)感染是鼻咽癌的病因之一，血漿EBV DNA濃度與鼻咽癌的分期、療效、預(yù)后相關(guān)，但血漿EBV DNA濃度與腫瘤負(fù)荷的關(guān)系，以及不同時期(治療前、治療后)EBV DNA的臨床意義，目前尚未明確。在本研究的第一部分，我們探討了NPC患者治療前、后血漿EBV DNA濃度與腫瘤負(fù)荷、臨床療效，尤其是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探索其作為分子分期指標(biāo)指導(dǎo)臨床治療選擇的可行性。 骨是鼻咽癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移最常見的部位，骨轉(zhuǎn)移瘤可

3、導(dǎo)致疼痛、運動功能障礙以及骨相關(guān)事件(Skeletal-related events,SREs，包括病理性骨折、脊髓壓迫等)等嚴(yán)重后果，顯著降低患者的生活質(zhì)量、縮短生存期，是影響惡性腫瘤治療成敗與患者生存的主要因素之一。在骨轉(zhuǎn)移瘤引起骨破壞的發(fā)生機制中，包括細(xì)胞因子的趨化、轉(zhuǎn)化作用及破骨細(xì)胞與成骨細(xì)胞的相互作用。骨唾液酸蛋白(Bonesialoprotein,BSP)、骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)是由成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞等合

4、成的細(xì)胞外基質(zhì)中的糖蛋白。近年的研究發(fā)現(xiàn)多種腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)有BSP、OPN，這兩種蛋白介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞容易粘附于成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞形成骨轉(zhuǎn)移病灶。由此認(rèn)為，這兩種蛋白的表達(dá)與惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移相關(guān)，可能是預(yù)后不良及早期發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的預(yù)測指標(biāo)。本研究第二部分將檢測鼻咽癌患者腫瘤組織中BSP和OPN的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系。雙磷酸鹽的應(yīng)用是惡性腫瘤骨轉(zhuǎn)移治療策略中的重要部分，但在鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的患者中雙磷酸鹽應(yīng)用的研究較少，

5、能否預(yù)防或減少SREs的作用不詳。近年來有研究報道，通過監(jiān)測一些特異性反映骨溶解的骨代謝生化指標(biāo)(Bonemarker)如：骨基質(zhì)Ⅰ型膠原的降解產(chǎn)物氨基末端肽(N-telopeptide，NTx)的水平(尿NTx的水平)，可以有效地預(yù)測雙磷酸鹽治療實體瘤骨轉(zhuǎn)移時SREs發(fā)生的風(fēng)險，監(jiān)測骨破壞、骨修復(fù)的情況。本研究第三部分將有骨轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者隨機分成兩組，一組在應(yīng)用常規(guī)化療的基礎(chǔ)上使用唑來磷酸治療，另一組單純化療，比較兩組患者治療過程中

6、尿NTx變化的差別，初步評價唑來磷酸治療鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移效果。 第一部分血漿EB病毒DNA定量檢測在鼻咽癌診治中的應(yīng)用研究 目的：EB病毒感染與鼻咽癌發(fā)病密切相關(guān)，本研究探討治療前、后血漿EBVDNA濃度與鼻咽癌腫瘤負(fù)荷、預(yù)后的關(guān)系。 方法：69例初治鼻咽癌患者分別在治療前、后采用熒光定量PCR方法檢測血漿EBV DNA濃度。通過逐層疊加CT/MRI上勾畫的鼻咽大體腫瘤體積和區(qū)域淋巴結(jié)體積之和計算為腫瘤體積。所有患者

7、按計劃隨訪，進(jìn)行遠(yuǎn)期療效及生存的評價。EBV DNA濃度與腫瘤體積的關(guān)系用Spearman相關(guān)系數(shù)表示，EBV DNA濃度組間比較用Kruskal-Wallis秩和檢驗，EBV DNA檢出率組間比較用x<'2>檢驗，壽命表法計算生存率，Kaplan-Meier法比較生存情況，并進(jìn)行Log-rank檢驗，Cox比例風(fēng)險模型進(jìn)行預(yù)后的多因素分析。 結(jié)果：治療前血漿EBV DNA濃度與腫瘤體積顯著相關(guān)(Spearman相關(guān)系數(shù)0.59

8、0；P<0.001)。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者治療前血漿EBV DNA中位濃度(27000copies/ml)及治療后EBV DNA檢出率(55.56﹪)均高于持續(xù)緩解者(4000eopies/ml，5.56﹪)及局部復(fù)發(fā)者(3850copies/ml，0﹪)，P值分別為0.039，0.001。以治療前20000copies/ml，治療后轉(zhuǎn)陰性(0 copies/ml)為界值點，治療前、后EBV DNA低濃度患者的無復(fù)發(fā)生存率、無轉(zhuǎn)移生存率及總生存

9、率均高于高濃度患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。綜合治療前后血漿EBV DNA濃度的生存分析顯示無論治療前EBV DNA是否大于20000copies/ml，治療后EBV DNA轉(zhuǎn)陰性的患者均有較好的無轉(zhuǎn)移生存(P=0.000)。Cox回歸分析顯示治療后血漿EBV DNA能否轉(zhuǎn)陰性是遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移唯一的獨立預(yù)后因素(P=0.004，HR=16.491)。 結(jié)論：治療前、后EBV DNA濃度在鼻咽癌診治中均具有不同的重要臨床意義。治療前EBV D

10、NA反映腫瘤負(fù)荷，預(yù)測療效和生存，而治療后血漿EBV DNA能否清除則能有效地預(yù)測遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。 第二部分 BSP、OPN在鼻咽癌的表達(dá)及預(yù)測鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的研究 目的：骨是鼻咽癌最常發(fā)生的轉(zhuǎn)移部位，目前尚無預(yù)測鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物。本研究探討鼻咽癌組織中BSP、OPN的表達(dá)及與鼻咽癌患者臨床特征、預(yù)后，尤其是骨轉(zhuǎn)移的關(guān)系。 方法：本研究收集1999年5月至2005年4月在中山大學(xué)腫瘤防治中心確診的136例Ⅲ～Ⅳ

11、期鼻咽癌初診患者鼻咽活檢石蠟標(biāo)本，制作成鼻咽癌組織芯片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測BSP、OPN蛋白的表達(dá)情況。蛋白表達(dá)情況組間比較用Kruscal-Wallis秩和檢驗，壽命表法計算生存率，Kaplan-Meier法比較生存情況，并進(jìn)行Log-rank檢驗，Cox比例風(fēng)險模型進(jìn)行預(yù)后的多因素分析。 結(jié)果：在136例鼻咽癌組織中BSP的陽性率為87.5﹪(H9/136)，陽性表達(dá)部位在腫瘤細(xì)胞胞膜及胞漿。OPN的陽性率為85.9﹪

12、(117/136)，陽性表達(dá)部位主要在腫瘤細(xì)胞胞膜及胞漿。BSP在未分化型非角化性癌(WHO分型：Ⅲ型)組織中的表達(dá)率高于分化型非角化性癌(WHO分型：Ⅱ型)(91﹪vs．72﹪，P=0.01)，在其它各臨床指標(biāo)組間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。OPN在初診時有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者腫瘤組織中的表達(dá)率高于無轉(zhuǎn)移者(100﹪vs．85.6﹪，P=0.03)，在其它各臨床指標(biāo)組間無差異。在有完整隨訪資料的119例患者，骨轉(zhuǎn)移患者的BSP高表達(dá)率與骨外轉(zhuǎn)移患者

13、、無轉(zhuǎn)移患者無明顯差異(68.8﹪vs．71.4﹪vs．50.6﹪，P=0.18)，OPN高表達(dá)率明顯高于骨外轉(zhuǎn)移患者、無轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(56.3﹪vs．42.9﹪vs．27.0﹪，P=0.05)。BSP高表達(dá)組與低表達(dá)組的2年無骨轉(zhuǎn)移生存率、無骨外轉(zhuǎn)移生存率、總生存率分別是82.10﹪vs．89.22﹪(P=0.31)、75.70﹪vs.85.99﹪(P=0.22)、86.40﹪vs.91.28﹪(P=0.68)，差異均無

14、統(tǒng)計學(xué)意義。OPN高表達(dá)組與低表達(dá)組的2年無骨轉(zhuǎn)移生存率、無骨外轉(zhuǎn)移生存率、總生存率分別是77.09﹪vs.89.41﹪(P=0.06)、70.21﹪vs.85.01﹪(P=0.03)、90.80﹪vs.87.38﹪(P=0.89)。 結(jié)論：BSP、OPN蛋白在鼻咽癌組織中高表達(dá)。BSP蛋白的表達(dá)與鼻咽癌的侵襲、轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)。OPN蛋白的表達(dá)與鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生初步顯示出一定關(guān)系，值得在擴大樣本量的試驗中進(jìn)一步證實，幫助篩選高

15、?；颊哌M(jìn)行更緊密的隨訪及預(yù)防性治療。 第三部分唑來磷酸降低鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移患者尿氨基末端肽的前瞻性、隨機、開放的臨床研究 目的：評價唑來磷酸聯(lián)合抗腫瘤治療與單純抗腫瘤治療降低鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移患者的尿氨基末端肽(NTx)水平的差異。 方法：20例初治鼻咽癌骨轉(zhuǎn)移患者隨機分組，分別接受唑來磷酸(4mg，每4周1次，連續(xù)3次)聯(lián)合抗腫瘤治療及單純抗腫瘤治療。所有患者在入組第1、5、9、10周采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測尿NTx值。主

16、要研究終點是尿NTx的改變(與基線水平相比治療3月后尿NTx的變化率)。 結(jié)果：試驗組平均基線尿NTx值為60.97±11.85 nM BCE/mM，末次隨訪平均尿NTx值為30.31±8.61 nM BCE/mM，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.01)。對照組平均基線尿NTx值為59.71±8.49 nM BCE/mM，末次隨訪平均尿NTx值為68.79±43.74 nM BCE/mM，較基線值上升(P=0.73)。試驗組NTx變化