鼻咽癌線粒體DNA變異的研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士掌位論文y767531鼻咽癌線粒體DNA變異的研究StudyontheVariationsofMitochondrialDNAinNasopharyngealCarcinoma專業(yè)：腫瘤學(xué)學(xué)位申請(qǐng)人：龐玲娟導(dǎo)師：梁小曼主任醫(yī)師邵建永研究員答辯委員會(huì)委員(簽名)薯^主席：委員：a瓤黧拓毫專中山大學(xué)腫瘤防治年心鼻咽瑤線粒俸DNA變異的研究龐玲娟碩士學(xué)位論文列，以PBMC的mtDNA為正常對(duì)照，當(dāng)正常對(duì)照mtDNA序歹lj與劍橋序

2、列不同，稱為多態(tài)變化：當(dāng)NPC組織mtDNA序列與正常對(duì)照不同，稱為體細(xì)胞突變。2、cNE2細(xì)胞在射線誘導(dǎo)下mtDNA變異的檢測(cè)CNE2細(xì)胞分組，分別予x線0Gy、20Gy、40Gy、60Gy、8OGy照射，于24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總DNA，PCR擴(kuò)增照射前后CNE2mtDNAD100p區(qū)及鄰近編碼區(qū)基因，測(cè)序，與劍橋序列比較，確定照射前后cNE_2細(xì)胞的變異位點(diǎn)、數(shù)甚；熒光定量PCR檢測(cè)細(xì)胞野生(Widetyp

3、eWT)型mtDNA及4977bp缺失(CD)型mtDNA水平，計(jì)算缺失變異率(CD／WT)。，3、CNE2細(xì)胞照射后存活與凋亡的變化CNE2細(xì)胞予x線0Gy、O5Gy、1OGy、2ocy、40Gy、60Gy、80Gy照射后，用集落形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞劑量存活分?jǐn)?shù)；采用線性二次函數(shù)模型擬和細(xì)胞輻射劑量存活曲線，分別求出放射生物學(xué)參數(shù)：n、B、a鄺、SF2。CNE2細(xì)胞予X線照射，于24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)收集細(xì)胞，CYlDSPIN甩片，

4、DAPI染色、HE染色觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；Tunel染色對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行原位標(biāo)記；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期時(shí)相變化和細(xì)胞凋亡指數(shù)：統(tǒng)計(jì)軟件SPSSll0對(duì)CNE2細(xì)胞的凋亡指數(shù)和mtDNA497Top缺失率進(jìn)行相關(guān)分析。結(jié)果l、NPC病人mtDNAD100p及鄰近編碼區(qū)基因的變異分析了23例NPc患者PBMCm∞NA序列，共發(fā)現(xiàn)248個(gè)多態(tài)變化，其中在Dloop區(qū)有63個(gè)位點(diǎn)發(fā)生多態(tài)變化，堿基多態(tài)頻率為638％(63／988)有59個(gè)