氯氰菊酯和氟氯苯氰菊酯免疫分析化學研究.pdf

1、本實驗以氯氰菊酯和氟氯苯氰菊酯為研究對象，合成了氯氰菊酯半抗原Cyp-Hp<,1>和氟氯苯氰菊酯半抗原Flu-Hp<,2>。采用活性酯法將半抗原與載體蛋白BSA和OVA共價偶聯(lián)，制備人工抗原，經紫外分析確定偶聯(lián)成功，以Cyp-Hp<,1>-BSA和Flu-Hp<,2>-BSA為免疫原免疫新西蘭白兔，分別獲得了針對氯氰菊酯和氟氯苯氰菊酯的特異性抗血清。間接ELISA法測定抗血清的中點效價為1.6×10<'4>，雙向瓊脂擴散法測定抗血清的效

2、價為1/16。以硫酸銨分步鹽析法分離抗血清中的抗體并凍干得抗氯氰菊酯抗體Abl和抗氟氯苯氰菊酯抗體Ab<,2>。分別用活性酯法和混合酸酐法制備了酶標半抗原(Cyp-Hp<,1>-HRP和Flu-Hp<,2>-HRP)，酶標記物既保持了免疫化學特性，又保持了酶活性，可用于免疫化學分析。 進一步研究了pH值、離子強度和有機溶劑在包被抗體-酶標半抗原(E-H)直接競爭ELISA中對氯氰菊酯與Abl親和作用的影響。結果表明：包被介質pH

3、為7.2時，固相載體對Ab<,1>的吸附性最好；反應介質pH為7.0時，Ab<,1>與氯氰菊酯的親和作用最強；離子強度在一定范圍內增大會提高Ab<,1>與氯氰菊酯的親和力；乙腈和丙酮對氯氰菊酯免疫分析結果的影響要大于甲醇。 成功建立了氯氰菊酯直接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了Ab<,1>最佳包被濃度為6μg/mL，酶標半抗原(Cyp-Hp<,1>-HRP)最佳稀釋度為64000倍。在優(yōu)化條件下，建立了氯氰菊酯的標準抑制曲

4、線，回歸方程I=0.1919LogC+0.5618，R<'2>=0.9913，線性范圍為100～0.01μg/mL，抑制中濃度IC<,50>=0.461μg/mL，IC<,20>=12ng/mL，RSD=17.26％(n=5)。 在空白青菜樣品中分別添加氯氰菊酯標樣，使樣品中氯氰菊酯的含量分別為0.5 mg/kg和5mg/kg兩個水平。添加樣品用丙酮提取，E-H直接競爭ELISA法測定，重復5次。氯氰菊酯添加濃度為0.5mg/k

5、g水平時，回收率80.29％～89.20％，RSD為 4.35％；氯氰菊酯添加濃度5mg/kg水平時，回收率89.68％～120.78％，RSD為11.88％。說明E-H直接競爭ELISA法能滿足氯氰菊酯殘留分析的要求。 成功建立了氟氯苯氰菊酯直接競爭酶聯(lián)免疫吸附分析法。方陣試驗確定了Ab<,2>最佳包被濃度為6μg/mL，酶標半抗原(Flu-Hp<,2>-HRP)最佳稀釋度為384000倍。建立了氟氯苯氰菊酯的標準抑制曲線，回