海洋微生物及其活性物質(zhì)防治植物病害的研究.pdf

1、從連云港海域的海水和海泥中分離到了644株海洋細(xì)菌，以水稻紋枯病菌為指示菌，經(jīng)過初篩、純化、定量復(fù)篩獲得11株抑菌效果較好的海洋細(xì)菌。室內(nèi)抑菌譜測(cè)定結(jié)果表明，海洋細(xì)菌Ns-sw-6、Ps-sw-20和Ps-sw-21對(duì)8種植物病原真菌有很好的抑制作用，分別是白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、水稻紋枯病菌(Rhizo

2、ctonia solani)、油萊菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichu capsici)、水稻惡苗病菌(Fusarium moniliforme)和辣椒疫霉(Phytopthora capsici)。菌株MG-sm-3，PY-sw-1，PY-sw-9對(duì)7種病原真菌有較好的抑制效果，而對(duì)辣椒疫霉(Phytoptora capsici)的抑菌活性很弱。產(chǎn)幾丁質(zhì)酶測(cè)定結(jié)果表明，

3、在11株海洋源拮抗細(xì)菌中，菌株P(guān)s-sw-20產(chǎn)幾丁質(zhì)酶。 盆栽和田間小區(qū)試驗(yàn)測(cè)定海洋源拮抗細(xì)菌對(duì)水稻紋枯病的控病能力，探索海洋源拮抗細(xì)菌在生物防治中的應(yīng)用前景。試驗(yàn)結(jié)果表明，海洋細(xì)菌PY-sw-1及其胞外物質(zhì)在盆栽和田間對(duì)水稻紋枯病的防治效果最好，盆栽試驗(yàn)7天和15天后調(diào)查的菌體防效分別為63.8％和61.1％，分別比陸源生防菌Bs-916的防效提高了13.73％和25.46％，其胞外物質(zhì)的防效分別為61.2％和55.5％，比

4、陸源生防菌在Bs-916的防效分別提高了25.41％和24.16％；兩次調(diào)查菌株P(guān)Y-sw-1菌體在田間的防效分別為62.2％和58.3％，比陸源生防菌Bs-916的防效提高了22.96％和41.16％，其胞外物質(zhì)的防效分別為53.9％和50.8％，比陸源生防菌Bs-916的防效提高了28.64％和35.83％。盆栽和田間試驗(yàn)結(jié)果表明，海洋源拮抗菌對(duì)植物病害具有一定的防治效果，在植物病害生物防治方面具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。 用硫酸銨

5、沉淀法提取11株海洋源拮抗細(xì)菌的胞外粗蛋白質(zhì)，抑菌活性結(jié)果表明，菌株P(guān)Y-sw-1的胞外蛋白提取物對(duì)7種植物病原真菌具有較強(qiáng)的抑制作用，它們分別是白菜黑斑病菌(A. brassicae)、稻瘟病菌(P,grisea)、番茄灰霉病菌(B．cinerea)、水稻紋枯病菌(R．solani)、油菜菌核病菌(S.sclerotiorum)、辣椒炭疽病菌(C.capsici)和水稻惡苗病菌(F．moniliforme)，對(duì)辣椒疫霉(P. caps

6、ici)沒有抑制作用。菌株Ls-sm-1、Ps-sm-9、Ns-sm-1、Ps-sm-7、MG-sm-2和MG-sm-3的硫酸銨提取物對(duì)A．brassicae有較弱的活性，而對(duì)4種病原真菌C.capsici，P.capsici，F(xiàn).moniliforme和P.grisea沒有抑菌活性；菌株Ns-sw-6、Ps-sw-20、Ps-sw-21和PY-sw-9的硫酸銨提取物對(duì)8種病原真菌均無(wú)抑菌活性?？捡R斯亮蘭G250測(cè)定各菌株胞外蛋白濃度的

7、結(jié)果表明，菌株P(guān)s-sw-20和Ps-sw-21的胞外蛋白濃度最高，分別為2.509 g/L和2.203 g/L，它們對(duì)水稻紋枯病菌沒有抑制作用；菌株P(guān)Y-sw-1產(chǎn)生的胞外蛋白質(zhì)濃度為1.255 g/L，抑菌活性結(jié)果表明，其對(duì)7種植物病原真菌有較強(qiáng)烈的抑制作用。海洋細(xì)菌PY-sw-1產(chǎn)生的粗抗菌蛋白對(duì)植物病原真菌的抑制作用主要表現(xiàn)在菌絲生長(zhǎng)受抑制或萎縮、菌絲扭曲、頂端膨大，原生質(zhì)外泄等。 海洋細(xì)菌PY-sw-1最佳生長(zhǎng)。NaC

8、l濃度為3％左右，能夠耐受最高NaCl濃度為14％；其最佳生長(zhǎng)pH為6.75；其最適生長(zhǎng)溫度范圍為25～35℃，28℃時(shí)抗菌物質(zhì)的產(chǎn)量最高。用硫酸銨沉淀法提取獲得的該菌株的胞外粗蛋白在37℃、經(jīng)蛋白酶K處理30min后，其活性下降了64.49％，木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶處理后仍具有部分抑菌活性，初步推斷海洋細(xì)菌PY-sw-1產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可能包含蛋白類。溫度高于50℃時(shí)，該粗抗菌蛋白活性下降，高溫高壓(120℃，0.1～0.5mp

9、a)處理20 min后其活性下降了71.97％；在pH 7.0時(shí)其抑菌活性最強(qiáng)，pH 2和12時(shí)其抑菌活性幾乎喪失。這些結(jié)果表明海洋細(xì)菌PY-sw-1產(chǎn)生的粗抗茵蛋白抑菌活性穩(wěn)定、適應(yīng)范圍廣，其在防治植物病害方面將具有重要的作用。 通過比較分析16S rDNA基因序列，海洋細(xì)菌PY-sw-1被鑒定為Bacillus sp.，與B．subtilis最為接近，有99.9％的相似性；產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株P(guān)s-sw-20被鑒定為Pseudoa