HP-Herceptin光敏免疫偶聯(lián)物的制備及體外光敏免疫效應(yīng)的研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文HPHerceptin光敏免疫偶聯(lián)物的制備及體外光敏免疫效應(yīng)的研究姓名：陳璐申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：羅榮城20060510中文摘要洗脫，收集暗紅色第一峰。3、薄層層析結(jié)果：純化后的產(chǎn)物呈暗紅色，用薄層層析對(duì)HP、赫賽汀及偶聯(lián)物進(jìn)行層析，紫外燈下觀察，可見游離HP被展開，而偶聯(lián)物依然在點(diǎn)樣位置，二者均有熒光，結(jié)果表明HP和Herceptin偶聯(lián)成功。4、紫外分光光度計(jì)法：測得HP最大吸收波長3675

2、nm為測定波長。HP溶液(O001％PBS液為溶劑)的濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，得回歸方程：Y=02136X一01206(R209991)，結(jié)果表明HP在1～9ttg／ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。同法配制赫賽汀溶液，測得其最大吸收波長是2637nm。得回歸方程：Y=21274X00052(R209992)，結(jié)果表明赫賽汀在0022～011mg／ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。由一定濃度的血卟啉在2637nm處的吸光值，根據(jù)Beer定律

3、AEcL，可計(jì)算出血卟啉在2637rim處的吸光系數(shù)E值。運(yùn)用雙波長法計(jì)算偶聯(lián)物中HP及赫賽汀含量，并按公式計(jì)算偶聯(lián)物中HP和赫賽汀的摩爾比：238：1。5、HPHerceptin偶聯(lián)物和Herceptin與SK—BR3膜漿抗原(Her2表達(dá)的P185蛋白)免疫活性測定結(jié)果顯示：抗體濃度從起始濃度750581xg／ml8級(jí)倍比稀釋，抗體此濃度范圍內(nèi)相對(duì)應(yīng)的HerceptinA492值為0786～0096；偶聯(lián)物的A492值為0833～0

4、154。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)Pearson相關(guān)分析，兩組曲線濃度與吸光度相關(guān)度好，呈正相關(guān)關(guān)系，咖99(p=0000)。兩條曲線基本重合，說明HP—Herceptin偶聯(lián)物的免疫活性較偶聯(lián)前的Herceptin并無明顯改變。6、MTT法，在HP劑量相同的情況下，HP一赫賽汀偶聯(lián)物對(duì)BT474細(xì)胞的殺傷效果明顯優(yōu)于游離IIP及單純赫賽汀組，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=O018)。顯微鏡下觀察，細(xì)胞的形態(tài)變化也證明了此結(jié)果，并且隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞死