山藥黏液酶解物的制備及免疫活性研究.pdf

1、作為傳統(tǒng)保健性食品，山藥供需量大，具有較多生理活性，在國內外受到普遍歡迎，大量研究發(fā)現，山藥中的主要特點是含有大量多糖-蛋白復合物，即黏液，但黏液黏度極大，不利于生產相應的食品及保健品，因此本文以鐵棍山藥(Dioscorea opposite Thunb.cv.Tiegun)為研究對象，選用胰蛋白酶、纖維素蛋白酶、復合蛋白酶對山藥黏液進行酶解，運用正交試驗優(yōu)化三種酶的酶解工藝，對山藥黏液及其酶解物的結構特征進行了測定，并探索了不同酶解物

2、對免疫抑制小鼠的免疫器官、細胞、分子的調節(jié)能力，以期獲得山藥黏液及其酶解物對機體的免疫活性影響差異及結構與免疫活性間的關系，為山藥黏液在保健品研發(fā)、新型食品開發(fā)及免疫藥品研制提供理論依據。
　　本研究主要內容包括：⑴鹽提醇沉方法提取山藥黏液，通過正交試驗優(yōu)化山藥黏液的提取工藝，研究了 NaCl濃度、浸提時間、料液比對黏液中多糖和蛋白含量的影響，確定了山藥黏液提取最佳工藝為：NaCl濃度為0.6mol/L，浸提時間24h，料液比1:

3、10；在此提取條件下，總蛋白含量為56.93％，總糖含量為40.87%，黏液的得率為0.313%。通過正交試驗分別優(yōu)化胰蛋白酶、纖維素酶、復合蛋白酶酶解山藥黏液的工藝，研究了加酶量、酶解 pH、酶解時間、酶解溫度對胰蛋白酶和復合蛋白酶酶解過程中水解度的影響，以及在纖維素酶酶解過程中還原糖含量的影響，得到胰蛋白酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為：加酶量為5000U/g，酶解 pH值為8，酶解溫度為40℃，酶解時間4h，在此條件下，胰蛋白酶酶解

4、山藥黏液的水解度為46.78%；纖維素酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為加酶量為6000U/g，酶解溫度為50℃，酶解pH值為5.5，酶解時間3h，在此條件下，纖維素酶酶解山藥黏液的還原糖含量為30.49%；復合蛋白酶酶解山藥黏液的最佳工藝條件為加酶量為7000U/g，酶解 pH值為7，酶解溫度為40℃，酶解時間為2h，在此條件下，復合蛋白酶酶解山藥黏液的水解度為30.36%。⑵山藥黏液及其酶解物的結構特征：SDS-PAGE測定結果顯示纖維

5、素酶酶解物除外，酶解后分子量變??；經紅外掃描，山藥黏液及其酶解物中存在二級結構為α-螺旋結構，糖苷鍵為吡喃型的分子，酶解切斷了山藥黏液分子間的氫鍵，其中纖維素酶作用于β-(1-4)糖苷鍵；紫外全波長掃描中，利用β-消除反應，證明山藥及其酶解物中存在 O-糖苷鍵，3種酶酶解并沒有破壞此糖苷鍵；電鏡掃描后發(fā)現四種物質分子在分子間距、分子形態(tài)上有差異。⑶山藥黏液及其酶解物的免疫活性：通過免疫抑制小鼠體內免疫器官指數，腹腔巨噬細胞吞噬能力，遲發(fā)

6、型變態(tài)反應，血清溶血素含量測定實驗比較了山藥黏液及其酶解物的免疫活性，得出不同濃度的山藥黏液及酶解物均可提高小鼠免疫調節(jié)能力，具有劑效關系，且酶解物的免疫調節(jié)能力高于黏液；小鼠脾臟和小腸石蠟切片實驗，得出山藥黏液及酶解物可以通過提高脾臟的白髓面積和小腸絨腺比(V/C)，提高小鼠的免疫防御能力，且胰酶酶解物的免疫調節(jié)能力較強；小鼠脾臟細胞因子 mRNA表達量的測定結果說明，山藥黏液及其酶解物可以通過恢復 Th2偏移狀態(tài)來調整免疫機能，且纖