DLL4-Notch1信號通路對白血病細胞系K562細胞生長的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:本研究將Notch的配體DLL4基因轉(zhuǎn)染慢性髓細胞白血病細胞系K562細胞,旨在探討外源性DLL4基因是否活化K562細胞內(nèi)Notch1信號通路,及對細胞增殖和凋亡的影響。
　　方法:試驗分組:①正常對照組(未轉(zhuǎn)染組);②陰性對照組(轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1組);③實驗組(轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pBudCE4.1-DLL4組)。采用脂質(zhì)體Lipofectinamine2000介導(dǎo)將各組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染K562細胞:①分別用RT-PCR和We

2、sternblot檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后各組細胞DLL4的mRNA及蛋白表達,同時用細胞免疫熒光化學(xué)法進一步證明DLL4蛋白是否在轉(zhuǎn)染細胞的細胞膜和細胞漿內(nèi)高表達;②分別用RT-PCR和Westernblot檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后各組細胞Notch1受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表達;③用CCK-8法檢測各組細胞的增殖情況,用流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后各組細胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:用脂質(zhì)體200

3、0介導(dǎo)各組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染K562細胞:①RT-PCR和Westernblot結(jié)果示轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后實驗組DLL4的mRNA及蛋白表達量比兩個對照組明顯增多(P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義),細胞免疫熒光化學(xué)法進一步證明DLL4蛋白主要在轉(zhuǎn)染細胞的細胞膜和細胞漿內(nèi)高表達,證明質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染K562細胞;②RT-PCR和Westernblot結(jié)果示轉(zhuǎn)染質(zhì)粒48小時后實驗組Notch1受體胞內(nèi)區(qū)(NICD)、下游靶基因Hes1的mRNA及蛋白表達量比兩

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