杭白菊病毒病原鑒定及脫毒苗生物學性狀與品質性狀分析.pdf

1、杭白菊（Chrysanthemun morifolium Ramat.）是浙江省桐鄉(xiāng)市的主要特產，是浙江省八大名藥材“浙八味”之一，近年來由于病毒病爆發(fā)嚴重影響了杭白菊的產量和品質，為此本文著重展開了分離和鑒定危害桐鄉(xiāng)市杭白菊的主要病毒病原，創(chuàng)制了杭白菊脫毒健康種苗，并分析了脫毒對杭白菊生物學性狀及品質性狀的影響。主要研究結果如下:
　　(1)調研了主產區(qū)桐鄉(xiāng)市杭白菊專業(yè)合作社，發(fā)現(xiàn)幾個重要種植基地病毒感染嚴重，病株的主要癥狀為葉

2、片斑紋明顯，花葉，分枝少，嚴重地塊葉片呈褐色斑枯，植株枯死，致使菊花產量下降、品質變劣。
　　(2)綜合運用病毒粒子形態(tài)、DAS-ELISA檢測、RT-PCR檢測及序列測定等技術進行病原菌鑒定，透射電鏡下觀察到病株汁液含600～700nm略微彎曲的桿狀病毒粒子;應用菊花B病毒(CVB)抗體進行DAS-ELISA檢測結果為陽性，對陽性結果進行分子水平檢測發(fā)現(xiàn)CVB外殼蛋白編碼序列長度為982bp，測序結果在NCBI中進行BLAST比

3、對，發(fā)現(xiàn)與報道的編碼菊花B病毒外殼蛋白的核苷酸序列(GenBank登錄號:EU499736.1)相似度最高為92％，可確定擴增片段為菊花B病毒的外殼蛋白基因，明確了侵染浙江省桐鄉(xiāng)杭白菊的病毒病原為CVB。
　　(3)采用“多步分步法”創(chuàng)制脫毒種苗，建立了杭白菊脫毒健康種苗的快速繁殖體系，外植體最佳的消毒處理為75％乙醇30s，0.1％氯化汞12min，成活率為70％;最適宜莖段生長壯苗的培養(yǎng)基為MS+0.1mg/L6-BA+0.1

4、mg/LNAA，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg/LNAA，生根率為100％;待植株株高為5～6cm，根數(shù)為3～5條，根長約1cm時移栽到溫室內生長，成活率可達100％。在解剖鏡下剝取0.3～0.5mm無菌苗莖尖，接種到培養(yǎng)基中進行莖尖苗的誘導，莖尖成活率約10％，經透射電鏡、RT-PCR及DAS-ELISA等方法檢測，獲得12％脫除CVB的杭白菊苗。經田間的推廣示范發(fā)現(xiàn)脫毒種苗在分枝數(shù)、有效花朵數(shù)、葉綠素相對含量參數(shù)方面與常規(guī)杭

5、白菊有顯著性差異，脫毒‘早小洋菊’的畝產量達490.1kg，脫毒‘小洋菊’的畝產量達1083.3kg，分別增產11％、29％。脫毒‘早小洋菊’、脫毒‘小洋菊’中總黃酮的含量分別為70.41mg/g，63.94mg/g，常規(guī)苗中含量分別為53.44mg/g，43.41mg/g;脫毒‘早小洋菊’、脫毒‘小洋菊’中綠原酸含量分別為2.71mg/g、2.13mg/g，常規(guī)苗中含量分別為1.62mg/g，1.01mg/g，脫毒苗中綠原酸含量高于藥