犬小孢子菌生物學(xué)性狀及基因分型研究.pdf

1、犬小孢子菌(Microsporum canis)歸屬于半知菌亞門-絲孢菌綱-絲孢菌目-叢梗孢科-小孢子菌屬，為發(fā)外型親動(dòng)物型皮膚癬菌，存在于自然界及貓，狗，兔等動(dòng)物毛皮上，可通過動(dòng)物-動(dòng)物，動(dòng)物-人的途徑傳染。研究表明，犬小孢子菌可導(dǎo)致頭癬，體癬和少數(shù)甲癬以及個(gè)別少見真菌病，一直是導(dǎo)致國內(nèi)外淺部真菌病特別是頭癬的重要病原菌。近年來，隨著人們生活水平的提高和飼養(yǎng)寵物之風(fēng)的盛行，頭癬的發(fā)病率居高不下。而犬小孢子菌作為頭癬中白癬和膿癬的主要致

2、病菌，對(duì)頭癬感染及傳染起著重要的作用。而且，犬小孢子菌傳染性強(qiáng)，在一定條件下還可在特定人群中出現(xiàn)暴發(fā)及引發(fā)泛發(fā)性淺部真菌病。綜上所述可見對(duì)其研究的必要性。 目的：1.分析本地犬小孢子菌致病情況。2.探討使用分子生物學(xué)技術(shù)鑒定皮膚癬菌的特異性和敏感性，以便在犬小孢子菌所致的真菌性疾病的鑒定中推廣應(yīng)用。3.觀察5種常用抗菌藥物抗菌效果，進(jìn)而為臨床犬小孢子菌所致疾病(頭癬、體癬)的用藥提供理論依據(jù)。 方法：2007年7月～20

3、07年12月，對(duì)蘭州大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診擬診為犬小孢子菌(頭癬及有可疑動(dòng)物接觸史的體癬)感染的患者，分別取其斷發(fā)、頭屑或皮屑做15％KOH直接涂片鏡檢。采用調(diào)查問卷的方式，詳細(xì)登記培養(yǎng)結(jié)果為犬小孢子菌患者的相關(guān)臨床資料。對(duì)陽性標(biāo)本行沙堡葡萄糖瓊脂及米飯培養(yǎng)基分離培養(yǎng)、鑒定菌種。采用真菌通用引物ITSl(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)、ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)對(duì)犬小孢子菌rD

4、NA的ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而從分子水平鑒定到犬小孢子菌種的水平。對(duì)基因組DNA采用限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析，用HinfI、Taq I兩種限制性內(nèi)切酶對(duì)ITS1、ITS4的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切并對(duì)酶切結(jié)果進(jìn)行分析。采用美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(clinical and laboratorystandard institute，CLSI，即原NCCLS)于2003年發(fā)表的針對(duì)產(chǎn)孢豐富絲狀真菌的微量稀釋法(M-38A)測定犬

5、小孢子菌對(duì)臨床5種抗真菌藥物的MIC值。 結(jié)果：1.55例犬小孢子菌感染患者，表現(xiàn)為頭癬者47例(85.45％)，體癬者8例(14.55％)。年齡1～47歲，其中10歲以下者52例(94.54％)，男40例(72.72％)，女15例(27.27％)。家住城市者42例(76.36％)，地縣及農(nóng)村者13例(23.63％)，49例(84.09％)有2周到1年半不等的動(dòng)物(貓狗馬兔)接觸史，8例(14.55％)例有與頭癬患者接觸史，親兄

6、弟，表兄妹同時(shí)感染頭癬各1例。2.引物ITS1、ITS4在犬小孢子菌均擴(kuò)增出-約760bp特異性條帶。3.Hinf I、Taq I各將犬小孢子菌切出兩條固定條帶。 4.抗真菌藥物的MIC范圍如下，伊曲康唑0.25-1μg/ml，益康唑0.25-2μg/ml，特比萘芬0.01-0.04μg/ml，灰黃霉素0.25-1μg/ml，氟康唑1-32μg/ml。 結(jié)論：1.調(diào)查的犬小孢子菌感染以10歲以下兒童為主，主要表現(xiàn)為頭癬中的白癬，