應(yīng)用組織芯片技術(shù)研究肺癌中Ets1 mRNA表達的生物學(xué)意義和相關(guān)分子機制.pdf

1、第一部分細胞芯片研究初探 目的：進行細胞芯片的研制，為快速、規(guī)范、簡便、經(jīng)濟地進行各項細胞學(xué)臨床和科研工作提供一種新的技術(shù)方法。 材料與方法：設(shè)計7×16點陣，運用自制的細胞陣列檢測裝置(專利申請?zhí)枺?005200278140)，選取含有腫瘤細胞的肺癌患者的胸水50例、非腫瘤患者胸水6例，經(jīng)離心等處理后，用微量移液器點入陣列相應(yīng)位置，每例2個點，即制成細胞芯片。經(jīng)固定后進行HE、免疫組化或熒光原位雜交等檢測，檢驗結(jié)果與每

2、例常規(guī)涂片進行對比。同時對該細胞芯片的研究結(jié)果與中晚期肺癌的組織芯片的研究結(jié)果進行比較，應(yīng)用四格表x2檢驗作統(tǒng)計學(xué)分析，檢驗水準α值規(guī)定為0.05。 結(jié)果：1細胞芯片HE染色結(jié)果制成的細胞芯片為112點，7×16點陣，點陣排列整齊，分布均勻，無掉片。將HE染色的細胞芯片各點進行顯微鏡下觀察，檢測結(jié)果與同時制作的相應(yīng)涂片進行比較，結(jié)果完全一致。50例肺癌標本均可見腫瘤細胞。 2細胞芯片熒光原位雜交結(jié)果對細胞芯片進行了Ets

3、1mRNA熒光原位雜交檢測，熒光顯微鏡下觀察：熒光清晰，背景干凈，腫瘤細胞胞漿呈黃綠色熒光，而細胞核無熒光顯示。所得陽性結(jié)果與各例相應(yīng)涂片檢測結(jié)果一致。 將細胞芯片檢測結(jié)果與進行Ets1mRNA熒光原位雜交的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 3細胞芯片免疫組化染色結(jié)果對細胞芯片進行了c-Met免疫組化染色后，細胞無明顯減少，所得陽性結(jié)果與各例相應(yīng)涂片檢測結(jié)果完全一致。 將細

4、胞芯片檢測結(jié)果與進行c-Met免疫組化染色的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進行比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 2結(jié)論：1細胞芯片可以替代細胞涂片進行臨床診斷和科學(xué)研究，尤其在樣本較多的情況下更顯示其優(yōu)越性。 2細胞芯片有望用于胸水、腹水、尿液、心包積液、腦脊液、痰以及培養(yǎng)細胞等細胞學(xué)檢測，具有診斷快速準確、特異性高、信息量大的特點，在臨床診斷、科研和流行病學(xué)篩查中有廣泛的應(yīng)用前景。 3本研究制作細胞芯片操

5、作簡單；細胞標本取來就可以開始操作，用時短；可以實現(xiàn)不同批次的標本同時進行免疫組化或原位雜交等檢測，可以節(jié)約試劑及實現(xiàn)實驗條件的標準化，減少系統(tǒng)誤差。 4將培養(yǎng)的細胞制作成細胞芯片，用于高通量地研究基因或蛋白質(zhì)表達的差異、試驗藥物的敏感性、毒性試驗以及轉(zhuǎn)染目的基因克隆的篩選等領(lǐng)域有望發(fā)揮巨大的作用。 5細胞芯片也有它的不足之處，如細胞陣列不能提供組織學(xué)結(jié)構(gòu)的信息，與組織芯片配合使用將在科學(xué)研究中發(fā)揮更大的作用。