山羊乳腺炎的人工誘發(fā)及卡介菌多糖核酸對乳腺的保護(hù)研究.pdf

1、本文通過建立的山羊模型，探討了大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)人工誘發(fā)山羊乳腺炎時，乳腺局部及整個機(jī)體免疫功能的變化；并通過給山羊施用卡介菌多糖核酸，探索其在山羊發(fā)生實(shí)驗(yàn)性乳腺炎時，對乳腺局部免疫和機(jī)體免疫功能的影響。1．乳頭管灌注內(nèi)毒素誘發(fā)山羊?qū)嶒?yàn)性乳腺炎模型的建立　　8只處于泌乳期的健康睢寧白山羊，產(chǎn)后72h分別用大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)和滅菌生理鹽水(PSS)經(jīng)乳頭管灌注山羊左右側(cè)乳房．于灌注的第0、3、6、9、24h分別采集頸靜脈血和左

2、右兩側(cè)乳房的乳汁，對采集的血清和乳汁中相關(guān)酶活性和細(xì)胞因子含量進(jìn)行測定，觀測其動態(tài)變化規(guī)律。試驗(yàn)表明，N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓過氧化物酶(MPO)、堿性磷酸酶(ALP)活性在實(shí)驗(yàn)乳腺(灌注LPS側(cè))的乳中隨時間呈現(xiàn)上升的變化，三者到達(dá)最大值的時間分別為第24h、第9h、第24h；而在血清中隨時間呈現(xiàn)下降的變化，三者到達(dá)最小值的時間分別為第9h、第9h、第24h。TNF-α、IL-1、IL-6水平在實(shí)驗(yàn)乳腺(灌

3、注LPS側(cè))的乳中隨時間呈現(xiàn)上升的變化，它們達(dá)到最大值的時間分別為第6h、第9h、第9h；血清中這些細(xì)胞因子隨時間也呈現(xiàn)上升的變化，它們達(dá)到最大值的時間分別為第6h、第9h、第6h；而對照乳腺(灌注PSS側(cè))的乳中酶和細(xì)胞因子水平隨時間的變化均無顯著變化。結(jié)果表明乳頭管灌注內(nèi)毒素誘發(fā)山羊?qū)嶒?yàn)性乳腺炎模型成功建立． 2．卡介菌多糖核酸對內(nèi)毒素誘發(fā)山羊?qū)嶒?yàn)性乳腺炎的保護(hù)研究　　6只處于泌乳初期的健康睢寧白山羊，體重30Kg左右．每天早上擠奶

4、后，用卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)和滅菌生理鹽水(PSS)經(jīng)乳頭管分別灌注到左右側(cè)乳房，每側(cè)各5ml，連續(xù)灌注6天，第7天早晨擠奶后，按50μg/kg體重于左右乳區(qū)分別同時注入LPS。跟蹤測量直腸溫度，并于灌注的第0、3、6、9、24h分別采集頸靜脈血和左右兩側(cè)乳房的乳汁，對采集的血清和乳汁中相關(guān)酶活性和細(xì)胞因子含量進(jìn)行測定．結(jié)果表明，灌注BCG-PSN的乳區(qū)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性在第6h達(dá)到最大，24

5、h時已恢復(fù)到正常水平；而灌注PSS的乳區(qū)乳中NAGase活性在24h內(nèi)一直上升。TNF-α僅測定結(jié)果表明，灌注BCG-PSN的乳區(qū)與灌注PSS的乳區(qū)乳中TNF-α變化相似，都是先上升后下降，但灌注BCG-PSN的乳區(qū)孔中TNF-α峰值比灌注PSS的乳區(qū)乳中TNF-α峰值出現(xiàn)得早而且小。結(jié)合其他酶及細(xì)胞因子的測定結(jié)果表明，通過乳導(dǎo)管灌注BCG-PSN可以降低炎癥反應(yīng)對乳腺和機(jī)體的損傷，并可通過促進(jìn)PMN的遷徙消除病原，對乳腺有保護(hù)作用。3

6、．人工誘發(fā)乳腺炎及BCG-PSN免疫調(diào)節(jié)劑對乳中乳鐵蛋白水平的影響 用ELISA法對實(shí)驗(yàn)一和實(shí)驗(yàn)二中定時采集的乳樣進(jìn)行乳鐵蛋白含量測定。結(jié)果顯示，在實(shí)驗(yàn)一LPS誘發(fā)山羊?qū)嶒?yàn)性乳腺炎時乳中乳鐵蛋白在LPS感染后含量上升，在第9h達(dá)到最高，此時與第Oh相比差異顯著(p<0.05)；而對照乳腺隨時間的變化有微弱的下降趨勢，各時間點(diǎn)與第Oh相比差異均不顯著，此下降可能是隨泌乳日期的增長乳鐵蛋白的生理性下降。在實(shí)驗(yàn)二BCG-PSN對實(shí)驗(yàn)性