龍膽草與高良姜對能量代謝相關基因表達影響的研究.pdf

1、中藥四性(即寒、熱、溫、涼)理論是中藥藥性理論的核心。寒為涼之甚，熱為溫之極，故從四性本質(zhì)屬性而言，只有寒熱兩性之分。“療寒以熱藥，療熱以寒藥”，是中醫(yī)臨床用藥的重要依據(jù)。寒熱皆與機體能量代謝息息相關。然而寒、熱性中藥作用于機體能量代謝具體靶點和通路，以及寒性、熱性中藥影響能量代謝的作用機制并不清楚。
　　 龍膽草(Radix gentianae)性寒、味苦，為典型寒藥。高良姜(Alpiniaofficinarum Hance)

2、性熱、味辛，為典型熱藥。線粒體是細胞能量代謝主要的場所。線粒體轉錄因子A(TFAM)、核呼吸因子(NRF)和過氧化物酶增殖激活受體γ輔激活因子(PGC-1α)是能量代謝重要的調(diào)節(jié)因子。DNA是調(diào)控基因表達的一種重要的表觀遺傳修飾方式。本研究以典型寒藥龍膽草和典型熱藥高良姜為研究對象，采用氧電極法、高效液相色譜、熒光定量PCR等方法(1)探討它們對正常大鼠肝臟和骨骼肌能量代謝部分指標的影響；(2)探討龍膽草對熱證大鼠能量代謝指標、調(diào)節(jié)能量

3、代謝因子基因表達和DNA甲基化有關的基因(Dnmt3a、Mbd4和Gdd45a)表達的影響。(3)探討高良姜對寒證大鼠能量代謝指標、調(diào)節(jié)能量代謝因子基因表達和DNA甲基化有關的基因表達的影響。
　　 結果表明：
　　 (1)寒藥龍膽草顯著增加正常大鼠肌糖原含量，減少正常大鼠血清游離脂肪酸的含量，降低了正常大鼠肝臟和骨骼肌琥珀酸脫氫酶(SDH)、Na+，K+-ATP酶和ca2+-ATP酶活性。熱藥高良姜能顯著減少正常大鼠肝

4、糖原和肌糖原含量，增加了大鼠血清游離脂肪(NEFA)含量，升高了肝臟和骨骼肌SDH、Na+，K+-ATP酶和Ca2+-ATP酶活性。寒性中藥龍膽草和熱性中藥高良姜對正常動物的能量代謝相關指標有相反的作用。
　　 (2)龍膽草能顯著降低熱證模型大鼠體溫，有效降低模型大鼠肝臟SDH活性，并能升高Na+，K+-ATP酶活性，提高RCR、ADP/O和EC值，提高ATP/AMP比值。高劑量龍膽草還能顯著降低Cox4 mRNA水平。低劑量龍

5、膽草顯著增加模型Nrf-1mRNA水平。寒藥龍膽草能緩解酵母所致熱證模型(體溫升高)大鼠部分異常指標，能糾正或部分糾正熱證模型的異常能量代謝相關指標。
　　 (3)高良姜能顯著升高寒證模型大鼠體溫，有效提高血清NEFA水平，提高寒證大鼠Ca2+-ATP酶活性，提高ATP/ADP比值和ATP/AMP比值，增加大鼠自主活動和EC值。而高劑量高良姜還能有效提高模型大鼠SDH活性，RCR和ADP/O，降低Nrf-2α mRNA水平。低劑

6、量高良姜能有效提高寒證大鼠Na+，K+-ATP酶活性。所以熱藥高良姜能緩解利血平所致寒證模型大鼠部分異常指標，能糾正或部分糾正熱證模型的異常能量代謝相關指標。
　　 (4)龍膽草能顯著上調(diào)正常大鼠骨骼肌Dnmt3α和Gdd45α基因的表達。陽性對照(甲狀腺摘除組)大鼠骨骼肌Dnmt3α、Mbd4和Gdd45α mRNA水平都顯著增加。龍膽草和甲狀腺摘除可能都有促進正常大鼠骨骼肌某些基因甲基化作用。高良姜對正常動物骨骼肌Dnmt3

7、α mRNA水平?jīng)]有顯著的影響。陽性對照組(甲狀腺片處理組)動物中Dnmt3α也顯著增加。
　　 (5)酵母所致熱證大鼠肝臟Dnmt3α和Mbd4 mRNA表達量都有顯著下降，高劑量龍膽草治療組的Dnmt3α、Mbd4和Gdd45α mRNA水平與熱證模型組沒有顯著差別。低劑量龍膽草組的Dnmt3α和Mbd4 mRNA水平比熱證模型組都有增加的趨勢，但是也未達到顯著水平。
　　 (6)利血平所致寒證大鼠肝臟Dnmt3α

8、mRNA表達量有顯著降低，而Mbd4和Gdd45α mRNA水平與空白對照組沒有顯著差別。高良姜治療組對寒證模型大鼠肝臟Dnmt3α和Gdd45α mRNA表達量沒有顯著改變，但能顯著增加寒證模型大鼠Mbd4 mRNA表達水平。
　　 論文從表觀遺傳學角度首次探討了龍膽草和高良姜對DNA甲基化轉移酶和DNA去甲基化相關因子的影響，對進一步深入探討表觀遺傳學與中藥的關系，提供了試驗數(shù)據(jù)支持；分析了甲狀腺功能亢進和低下大鼠模型DNA