膀胱移行細胞癌潛在生物標記物探索——1，膀胱移行細胞癌p16基因甲基化研究——2，膀胱移行細胞癌差異表達microRNA研究.pdf

1、膀胱癌是國人泌尿系統(tǒng)中最常見的腫瘤，其中超過90％為移行細胞癌。目前，膀胱移行細胞癌診斷主要依賴于膀胱鏡檢結合病理學檢查。然而膀胱鏡檢為有創(chuàng)檢查，而且組織病理學對膀胱移行細胞癌進行的分期或分級難于早期地準確預測大多數(shù)膀胱移行細胞癌的預后情況。因此尋找新的生物標記物以用于膀胱移行細胞癌的早期診斷、監(jiān)測復發(fā)和判斷預后已成為一個研究熱點問題。近年來研究表明，腫瘤中常出現(xiàn)表觀遺傳性狀改變和微小核糖核酸(microRNA，miRNA)表達異常，它

2、們成為腫瘤診斷、治療有效的潛在靶點，但目前在膀胱移行細胞癌中的研究尚處于探索階段。為此，本論文對膀胱移行細胞癌表觀遺傳性狀的改變以及microRNA差異表達兩方面內(nèi)容進行探討，期以尋找診斷與治療膀胱腫瘤新的靶點。
　　 表觀遺傳修飾改變是指基因表達或蛋白表達發(fā)生改變而基因型未發(fā)生變化，同時又可以通過細胞分裂和增殖而穩(wěn)定遺傳的現(xiàn)象，主要包括DNA甲基化，組蛋白修飾等，其中DNA甲基化是目前研究得最清楚，也是最重要的表觀遺傳修飾形式

3、。研究表明，許多膀胱移行細胞癌中出現(xiàn)抑癌基因DNA啟動子區(qū)發(fā)生超甲基化，從而導致抑癌基因表達沉默，導致腫瘤發(fā)生。這些DNA甲基化修飾的改變?yōu)榘螂滓菩屑毎┰\斷提供潛在靶標。p16基因是一重要的抑癌基因，近來研究結果也表明一些膀胱移行細胞癌中p16基因啟動子區(qū)發(fā)生高甲基化，提示p16基因表觀遺傳改變可能是膀胱移行細胞癌發(fā)生發(fā)展的重要原因之一，但目前尚缺乏對國人膀胱移行細胞癌患者p16基因甲基化系統(tǒng)性的研究。為此，本論文第一部分采用甲基化特

4、異性的PCR法系統(tǒng)檢測了35例膀胱移行細胞癌癌組織及與其相匹配的尿液標本中p16基因啟動子區(qū)5'CpG島的甲基化狀態(tài)，探討國人膀胱移行細胞癌患者中p16基因甲基化情況，并探討尿液細胞沉渣標本中p16基因甲基化在膀胱移行細胞癌診斷，尤其是非浸潤性膀胱癌早期診斷中的臨床意義。
　　 最近研究發(fā)現(xiàn)microRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。microRNA通過不完全匹配的方式與mRNA結合，使目的mRNA降解或抑制目標mRNA的翻譯

5、，從而實現(xiàn)在轉錄后水平抑制靶基因表達。研究報道許多腫瘤組織/細胞中單個microRNA或microRNA表達譜發(fā)生顯著改變，這些microRNA很可能成為腫瘤診斷、治療極具潛力的新的靶點。明確膀胱移行細胞癌中特異表達的microRNA或microRNA譜并揭示差異表達的microRNA的生物學功能將有助于對膀胱移行細胞癌發(fā)病機制的認識，并可能為膀胱移行細胞癌診斷提供新的生物標記物，然而目前microRNA在膀胱移行細胞癌中表達情況及其在

6、膀胱移行細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用研究尚處于探索階段。為此，本論文第二部分選擇7例處于不同分期、分級的膀胱移行細胞癌患者的癌組織，分別以自身健康膀胱組織為對照，利用microRNA芯片的方法系統(tǒng)研究了膀胱移行細胞癌組織差異表達的microRNA。
　　 小結：
　　 1.本研究發(fā)現(xiàn)，膀胱移行細胞癌患者癌組織中抑癌基因p/6基因啟動子區(qū)高甲基化達51.4％，導致了p16基因轉錄沉默、推測由此引致膀胱癌的發(fā)生。研究結果還表明，抑

7、癌基因p16的高甲基化與患者年齡、性別、腫瘤的分級分期無相關性。
　　 2.本研究還發(fā)現(xiàn)，在非浸潤性膀胱移行細胞癌患者中，尿液p16基因啟動子區(qū)有50％出現(xiàn)高甲基化，提示這種檢測方法經(jīng)進一步完善，有可能作為非浸潤性膀胱移行細胞癌早期診斷的生物標記物。
　　 3.本研究發(fā)現(xiàn)，在3例T1期膀胱移行細胞癌患者中，其癌組織均有13個miRNA(miR-let-7a、7b、7c、7d、m1R-143、miR-199a*，miR-2

8、1、miR-24、miR-26a、miR-29c、miR-30a-5p，miR-30c和miR-30e-5p)的表達水平下調(diào)，同時有9個miRNA(miR-129、miR-141、 miR-494、miR-498、miR-500、miR-513和3個未命名的miRNA)共同表達上調(diào)，而在4例T2期膀胱移行細胞癌患者中，其癌組織中有4個miRNA(miR-26a、miR-29c、miR-30c和miR-30e-5p)共同表達下調(diào)，但沒有任

9、何1例miRNA共同表達上調(diào)，此結果表明：
　　 ①miR-26a、miR-29c、miR-30c和miR-30e-5p四個microRNA在所有檢測的患者的癌組織標本中均表達下調(diào)，表明這四個miRNA的下調(diào)在膀胱移行細胞癌的發(fā)生中扮演重要角色；
　　 ②上述四個miRNA的下調(diào)，若同疇合并有上述9個miRNA(miR-129、miR-141、 miR-494、miR-498、miR-500、miR-513和3個未命名的