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文檔簡介
1、水稻橙葉?。≧ice Orange Leaf Disease,ROLD)是一種由植原體(Phytoplasma)引起的病害,上世紀(jì)80年代末至90年代初,該病曾在華南局部地區(qū)流行成災(zāi),對水稻生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害,此后的十多年里未見其嚴(yán)重發(fā)生的報道。早期研究認(rèn)為,該病僅由電光葉蟬(Inazuma dorsalis)傳播,但本研究室近年發(fā)現(xiàn),可能因病菌變異,該病也可經(jīng)黑尾葉蟬(Nephotettix cinticeps)高效傳播。由于病害獲得了
2、新介體的傳播能力,監(jiān)測其發(fā)生流行動態(tài)并建立病菌快速檢測技術(shù)十分必要。為此,本研究對華南地區(qū)進(jìn)行了廣泛的田間調(diào)查,明確了該病的分布與發(fā)生現(xiàn)狀;采用深度測序的方法獲得了病菌近全長基因組序列;以水稻橙葉植原體侵染必需的細(xì)胞分裂蛋白基因序列為靶標(biāo),開發(fā)了病菌特異 PCR檢測技術(shù);同時建立了同步檢測水稻植株及單頭葉蟬體內(nèi)水稻橙葉植原體和水稻瘤矮病毒的雙重一步RT-PCR檢測方法。主要結(jié)果如下:
1、明確了華南地區(qū)水稻橙葉病分布區(qū)域及發(fā)生
3、現(xiàn)狀。2015年早稻、晚稻及2016年早稻生長期間,對華南稻區(qū)進(jìn)行了廣泛的田間調(diào)查,結(jié)果顯示,水稻橙葉病發(fā)生區(qū)域明顯擴(kuò)大,除老病區(qū)粵西南和桂東南外,在粵西、粵北、珠三角地區(qū)及海南中部均發(fā)現(xiàn)該病,部分地區(qū)發(fā)生偏重,以粵西南的羅定市受害最重。結(jié)合對田間傳病介體,尤其是新介體黑尾葉蟬發(fā)生情況的調(diào)查,推測水稻橙葉病極有可能我國南部稻區(qū)存在流行成災(zāi)的高風(fēng)險。
2、獲得了水稻橙葉植原體基因組近全長核苷酸序列。以基于病菌16S rDNA序列
4、設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行半定量巢式 PCR檢測,結(jié)果表明,分蘗期水稻病株完全現(xiàn)癥葉片的葉鞘組織病菌含量最高,其次為病葉主脈,再次為葉片組織。采集完全顯癥葉片葉鞘組織,抽提總DNA,經(jīng)超聲波處理隨機(jī)打斷后,采用illumina HiseqTM2000測序平臺對總DNA進(jìn)行深度測序,獲得6.525G Clean reads,以洋蔥黃化植原體全基因組為參考序列,利用生物信息學(xué)軟件篩選并組裝為60條平均長度為9389nt的Contigs,最終獲得了長度約
5、607385bp的水稻橙葉植原體框架序列,推測該框架序列占基因組全長70%以上。
3、建立了水稻橙葉病PCR檢測方法與同步檢測水稻橙葉植原體和水稻廇矮病毒的雙重一步RT-PCR方法。選取水稻橙葉病植原體侵染必需的細(xì)胞分裂蛋白基因,設(shè)計(jì)引物建立ROLP的PCR檢測方法,擴(kuò)增產(chǎn)物大小為492bp,可經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳清晰判別,檢測靈敏度為10-3每100mg病葉組織總DNA提取物與10-1單頭介體葉蟬總DNA提取物。水稻橙葉病和瘤矮
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