水稻單倍體染色體加倍及不同倍性植株莖解剖結(jié)構(gòu)比較研究.pdf

1、洳≯≥I遙碩士學(xué)位論文⑧水稻單倍體染色體加倍及不同倍性植株莖解剖結(jié)構(gòu)比較研究作者姓名指導(dǎo)教師學(xué)科(專業(yè))金亮薛慶中教授作物遺傳育種所在學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院提交日期二OO六年五月中蘑杭州摘要花藥培養(yǎng)技術(shù)作為產(chǎn)生變異和加快性狀穩(wěn)定的輔助手段，已在水稻育種上廣泛應(yīng)用。通過花藥培養(yǎng)獲得的水稻植株中，具有豐富’的倍性變異，通常需在成熟期基于形態(tài)特征識(shí)別單倍體、二倍體及多倍體?；ㄅ嘀仓曛械膯伪扼w必需進(jìn)行染色體染色體加倍才能用于育種實(shí)踐。本研究采用

2、抗微管除草劑Oryzalin(3，5一二硝基∥，∥丙基磺胺)與秋水仙堿進(jìn)行了水稻單倍體加倍效果的比較實(shí)驗(yàn)，并探討了使用流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM)進(jìn)行倍性鑒定相關(guān)的技術(shù)及利用石蠟切片法對(duì)不同倍性的花培植株莖解剖結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較研究。其主要結(jié)果如下：1比較Oryzalin與秋水仙堿對(duì)水稻單倍體的染色體加倍效果，設(shè)置了三組處理。(1)分別用濃度為125mmol／L、250mmol／L、500mmol／L的秋水仙堿和10肛mo

3、l／L、259mol／L、509mol／L、100IIunol／L、200pmol／L的Oryzalin對(duì)單倍體植株進(jìn)行浸根24h加倍處理(以一k各溶液均添加2％的二甲基亞砜)；(2)以添加2％的二甲基亞砜(DMSO)的250mmol／L的秋水仙堿、509mol／LOryzalin溶液分別設(shè)置12h、24h、48h處理；(3)在250mmol／L的秋水仙堿、509mol／LOryzalin溶液中分別添加O％、1％、2％、4％DMSO進(jìn)行

4、浸根24h加倍處理。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于FC311添加2％的二甲基亞砜的125mmol／L秋水仙堿和添加2％的二甲基亞砜的259mol／LOryzalin的加倍處理效率最高分別為306％和139％：而在FC322中，添加2％甲基亞砜的250mmol／L秋水仙堿和添加2％甲基亞砜的509mol／LOryzalin的加倍處理效率最高，分別為25O％和222％。本研究表明秋水仙堿仍是水稻單倍體加倍的最有效的處理劑。2采用6種細(xì)胞核分離緩沖液制備用于

5、流式細(xì)胞術(shù)分析使用的水稻細(xì)胞核懸液，發(fā)現(xiàn)使用Ottobuffers和Marie’Snuclearisolationbuffer產(chǎn)生的變異系數(shù)較小(CV分別為357％和34l％)，其次為L(zhǎng)ysisbufierLB0l(CV為475％)，但Ottobuffers的成分及制備的條件最簡(jiǎn)單。Tris—MgCl2buffer產(chǎn)生較多的背景碎片。作者推薦使用Ottobuffers制備水稻細(xì)胞核懸液。3以花藥培養(yǎng)獲得的粳稻FC31l單倍體(2n=x=