沙蘆草染色體加倍技術(shù)及再生體系建立研究.pdf

1、為提高沙蘆草(Agropyron mongolicum Keng)的品質(zhì)，本研究選用種子和分蘗芽?jī)煞N材料，采用不同濃度秋水仙素（0.02％，0.05％，0.08％，0.11％，0.14％+1.5％二甲基亞砜）和氟樂靈(1，5，10，15，20μmol·L-1)處理沙蘆草種子，同時(shí)用浸有不同濃度的秋水仙素(0.025％、0.050％、0.075％、0.100％、0.150％、0.200％)和氟樂靈(50、100、150、200、250、3

2、00、350、400、500μmol·L-1)的脫脂棉對(duì)分蘗芽做包埋處理，并進(jìn)行表觀形態(tài)及染色體數(shù)目的鑒定，從而選取最優(yōu)加倍方案。此外，為加快沙蘆草的生長(zhǎng)速度，縮短試驗(yàn)進(jìn)程，本研究對(duì)沙蘆草再生體系進(jìn)行了篩選，結(jié)果如下:
　　經(jīng)處理的沙蘆草種子成苗后的變異植株均為二倍體與四倍體的混倍體;形態(tài)學(xué)及細(xì)胞學(xué)鑒定結(jié)果顯示，沙蘆草幼苗形態(tài)出現(xiàn)不同程度的變異（粗化苗、卷化苗和球狀苗），種子的平均發(fā)芽率隨誘變劑濃度的升高和時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，苗高與

3、根長(zhǎng)均低于空白對(duì)照，各濃度處理的株高與葉寬隨浸泡時(shí)間的延長(zhǎng)呈先增大后減小的趨勢(shì)。
　　經(jīng)染色體鑒定得出最適加倍處理方案:0.11％秋水仙素+1.5％二甲基亞砜處理20h的染色體數(shù)目變異率最大，高達(dá)50％，成活率為40％;1μmol·L-l氟樂靈處理30h變異效果最顯著，變異率達(dá)38.46％，成活率為81.25％。
　　用不同濃度的秋水仙素和氟樂靈對(duì)分蘗芽進(jìn)行包埋處理，綜合成活率、株高及植株恢復(fù)培養(yǎng)后的分蘗芽再生能力3項(xiàng)指標(biāo)，

4、秋水仙素更適宜作為加倍試劑。
　　通過沙蘆草再生體系各階段的比較，沙蘆草種子消毒的最佳組合為:無內(nèi)外稃沙蘆草種子經(jīng)75％酒精浸泡1min+0.1％ HgCl2消毒6min，在零染菌率的基礎(chǔ)上發(fā)芽率可達(dá)85％;誘導(dǎo)愈傷組織的方法為:以莖尖為外植體，1/2MS+1.5mg·L-12，4-D+0.06mg·L-16-BA的培養(yǎng)基培養(yǎng)，出愈率可達(dá)70％以上。1/2MS+1.5mg·L-12，4-D的繼代培養(yǎng)基可改良愈傷組織質(zhì)量，使胚性愈傷