槲皮素-3-O-芹菜糖基蘆丁糖甙抗抑郁作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究抗抑郁劑槲皮素-3-O-芹菜糖基蘆丁糖甙(代號(hào)：CTN-986)，一種從棉籽中提取的新型黃酮類(lèi)化合物的抗抑郁作用機(jī)制。 方法：(1)利用5-羥色胺酸(5-HTP)誘導(dǎo)的小鼠甩頭以及5-HT1A受體特異性激動(dòng)劑8-OH-DPAT誘導(dǎo)的小鼠體溫下降模型，觀察CTN-986的抗抑郁作用及其可能作用環(huán)節(jié)。(2)運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法，觀察CTN-986對(duì)慢性應(yīng)激小鼠海馬齒狀回神經(jīng)元再生以及腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)表達(dá)的影

2、響。(3)分離培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)前體細(xì)胞，運(yùn)用免疫細(xì)胞化學(xué)的方法對(duì)所培養(yǎng)的細(xì)胞特性進(jìn)行鑒定。用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷摻入法觀察CTN-986對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)前體細(xì)胞增殖的影響，并初步探討其作用機(jī)制。 結(jié)果：(1)CTN-986可以增加5-HTP誘導(dǎo)的小鼠甩頭次數(shù)，進(jìn)一步提示CTN-986具有明確的抗抑郁活性，并且該活性與增強(qiáng)5-HT神經(jīng)功能有關(guān)；同8-OH-DPAT一致，CTN-986可以顯著地降低小鼠體溫，而5-HT

3、1A受體特異性拮抗劑WAY-100635可以明顯減弱此降溫作用，提示CTN-986抗抑郁作用的發(fā)揮與激活5-HT1A受體關(guān)系密切。(2)慢性應(yīng)激21d的大鼠海馬齒狀回中BrdU標(biāo)記的新生神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目明顯減低，BDNF的表達(dá)水平也明顯降低，如同時(shí)給予丙咪嗪或CTN-986可以顯著增加BrdU標(biāo)記的新生神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目，提高BDNF的表達(dá)水平，并且BrdU標(biāo)記的新生細(xì)胞21d后部分可以表達(dá)成熟神經(jīng)元的標(biāo)志神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)。(3)所

4、培養(yǎng)的細(xì)胞呈球狀生長(zhǎng)，免疫組化鑒定結(jié)果表明，此神經(jīng)球可以表達(dá)未分化神經(jīng)細(xì)胞的主要標(biāo)志神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白(Nestin)，可以摻入外源性給予的細(xì)胞增殖特異性標(biāo)記物之一溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)；在體外，我們所培養(yǎng)的細(xì)胞可以增殖，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)合用時(shí)，可以顯著地促進(jìn)細(xì)胞增殖；將EGF、bFGF從神經(jīng)前體細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基中撤除，神經(jīng)前體細(xì)胞可以被誘導(dǎo)分化，分化后的細(xì)胞可以表達(dá)NSE或成熟星形膠質(zhì)細(xì)胞

5、特異性標(biāo)志—膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)。這些結(jié)果提示，我們所培養(yǎng)的細(xì)胞具有神經(jīng)前體細(xì)胞的特性。藥物研究發(fā)現(xiàn)，氟西汀(1-2μM)和CTN-986(2-250μM)作用4d，可以顯著促進(jìn)神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖；而同時(shí)給予WAY-100635(0.1μM)可以拮抗CTN-986誘導(dǎo)的神經(jīng)前體細(xì)胞的增殖作用。在PC12細(xì)胞上也得到了同樣的結(jié)果。 結(jié)論：CTN-986在經(jīng)典的抗抑郁動(dòng)物模型中具有明確的抗抑郁活性，其抗抑郁作用可能與以下機(jī)制