藥用植物猴耳環(huán)離體快繁體系建立.pdf

1、猴耳環(huán)Pithecellobium clypearia(Jack) Benth.為豆科猴耳環(huán)屬多年生高大喬木，又名圍涎樹，蛟龍木，廣布我國浙江、廣東、廣西、福建、臺灣及云南等地區(qū)，以干燥帶葉嫩莖枝入藥，具有清熱解毒，祛濕斂瘡的功效，為南方地區(qū)習用中草藥。猴耳環(huán)單味制劑猴耳環(huán)消炎片、猴耳環(huán)消炎顆粒、猴耳環(huán)消炎膠囊作為呼吸道疾病用藥廣泛用于臨床，已被列入我國中藥保護品種。猴耳環(huán)藥材主要來源于野生資源，過度的開發(fā)采集導(dǎo)致野生藥材蘊藏量急劇下降

2、，無法滿足市場需求。為保證藥材供應(yīng)，保護野生資源，實現(xiàn)藥材資源可持續(xù)利用，開展猴耳環(huán)人工種植勢在必行。
　　目前，猴耳環(huán)主要通過種子繁殖，但種子生物學研究表明，猴耳環(huán)種子具有頑拗性，其壽命短，不耐儲藏，并且種子凈度低，蟲害嚴重。這些問題嚴重制約著實際生產(chǎn)，限制大規(guī)模規(guī)范化種植開展。同時，猴耳環(huán)扦插實驗研究發(fā)現(xiàn)，猴耳環(huán)為難生根樹種，扦插成活率極低，無法用于實際生產(chǎn)。因此，開展猴耳環(huán)離體快繁技術(shù)的研究，滿足種苗需求，對猴耳環(huán)中藥材規(guī)范

3、化、規(guī)?；a(chǎn)及優(yōu)良種質(zhì)種苗繁育和可持續(xù)利用有重要實踐意義。
　　1、國內(nèi)外研究綜述
　　查閱了大量與本研究相關(guān)的國內(nèi)外文獻資料，歸納總結(jié)了猴耳環(huán)的研究進展，包括本草考證，生藥學，化學成分，藥理作用與臨床應(yīng)用、質(zhì)量標準等方面。并從無菌材料獲得，叢芽初代誘導(dǎo)與繼代增殖、愈傷組織誘導(dǎo)與分化、生根誘導(dǎo)和移栽等方面概述含羞草亞科木本植物組織培養(yǎng)研究進展。
　　2、無菌材料的獲得
　　以猴耳環(huán)成年植株的嫩莖枝為供試材料，考

4、察不同部位，滅菌處理方式、抗褐化方式的影響，發(fā)現(xiàn)外植體內(nèi)生菌和褐化現(xiàn)象嚴重，成活無菌材料獲得率極低。以猴耳環(huán)成熟種子為實驗材料，比較了種子預(yù)處理方法、滅菌方式和培養(yǎng)條件對無菌材料獲得的影響，結(jié)果表明:猴耳環(huán)種子去種皮后，0.1％ HgCl2處理12 min，接種于1/2MS+AC1.0 g/L培養(yǎng)基中，污染率為16.10％，無菌萌發(fā)率為78.66％，小苗生長健壯。以種子自然條件萌發(fā)生長1～2月小苗為外植體，70％酒精處理30s，0.1％

5、 HgCl2處理12 min，接種于1/2MS+PVP1.0 g/L培養(yǎng)基中，無菌存活率可達到49.17％。
　　3、叢芽初代誘導(dǎo)和繼代增殖
　　叢芽初代誘導(dǎo)比較了ZT、TDZ、6-BA和NAA配合使用的影響。結(jié)果表明:初代誘導(dǎo)適宜配方為MS+6-BA0.50 mg/L+ NAA0.05 mg/L，誘導(dǎo)率為100％，增殖系數(shù)為3.78，叢芽長勢好。
　　叢芽繼代增殖過程中，考察6-BA、NAA和IBA對繼代增殖的影響，

6、并進一步研究了糖類、糖濃度、水解乳蛋白、花寶5號和光照時間的作用，篩選出適宜的叢芽繼代配方為MS+6-BA0.70 mg/L+NAA0.05 mg/L+IBA0.30 mg/L+花寶五號0.50 mg/L～0.80mg/L+蔗糖20 g/L;培養(yǎng)條件為:光照強度為2500～3000 Lx，光照時間10～12 h/d;繼代增殖系數(shù)可達到4.20～4.94，三次繼代增殖效果較穩(wěn)定。
　　4、壯苗生根和煉苗移栽
　　壯苗生根實驗中

7、，考察了基本培養(yǎng)基的種類，植物生長素的種類、濃度，蔗糖濃度，活性炭濃度的影響，并比較了直接生根法、浸蘸生根法、兩步生根法和新型生根劑根太陽的壯苗生根效果。結(jié)果表明:大規(guī)模生產(chǎn)適宜的壯苗生根方式為直接生根法，培養(yǎng)基配方為1/2 MS+IBA0.50 mg/L+AC0.10～0.30 g/L+蔗糖20 g/L，生根率可以達到100％，根系分化完善，小芽長勢好。
　　煉苗移栽實驗中考察了開蓋天數(shù)及不同基質(zhì)對成活率的影響，結(jié)果表明，移栽前