油桐組織快繁與離體再生體系的建立.pdf

1、油桐(Verniciafordii)屬大戟科(Euphorbiaceae)油桐屬(VerniciaL.)落葉喬木，是我國特有的木本油料經(jīng)濟樹種之一。桐油是極好的干性油，并且是極具潛力的生物柴油資源。油桐的傳統(tǒng)栽培繁殖方式較為單一，其常規(guī)繁殖方法以實生苗繁殖和嫁接繁殖為主，扦插繁殖較為困難，而如組織培養(yǎng)和非試管快繁技術等較為先進的育苗技術的發(fā)展則更為緩慢。因此，為了保持油桐優(yōu)良品種的性狀，進行組織培養(yǎng)快速繁殖，通過工廠化獲得大量優(yōu)質(zhì)苗木，

2、具有重要的意義;同時建立油桐離體再生體系，將為進一步通過轉(zhuǎn)基因技術培育油桐優(yōu)良品種奠定良好的基礎。主要結(jié)果如下:
　　 1、油桐組培快繁體系的建立
　　 本研究以野外多年生和溫室一月生油桐頂芽為研究材料，摸索了其消毒方式，結(jié)果發(fā)現(xiàn)野外多年生外植體消毒效果不佳，存活率低，溫室一月生外植體最佳消毒方式為75％酒精30s+0.1％Hgcl2時間10min;獲得的溫室一月生外植體無菌苗經(jīng)過初代培養(yǎng)——繼代培養(yǎng)——生根培養(yǎng)后獲得完

3、整植株;其中初代培養(yǎng)最佳啟動培養(yǎng)基為MS+1.5mg/L6-BA+0.01mg/LIBA，啟動較快，誘導率達到66.51％，有效芽數(shù)最高;繼代增殖培養(yǎng)基最優(yōu)組合為MS+1.0mg/L6-BA+0.01mg/LIBA，增殖系數(shù)達到3.1，植株生長正常;再生植株進行生根培養(yǎng)，最佳培養(yǎng)基1/2MS+0.5mg/LIBA，根粗壯，平均根數(shù)達到3.07，移栽成活率較高，可達到96.43％;在外植體褐化防治方面，向培養(yǎng)基中添加的80mg/L的Vc可

4、以有效減輕褐化程度。
　　 2、油桐離體再生體系的建立
　　 本實驗對油桐離體再生兩條途徑進行了研究，即通過愈傷組織進行植株再生和直接誘導不定芽進行再生。兩條途徑所用實驗材料均為無菌苗真葉和下胚軸，在無菌苗萌發(fā)試驗中，種子胚最佳萌發(fā)培養(yǎng)基為1/2MS;
　　 經(jīng)愈傷組織途徑進行植株再生這一途徑中，真葉葉盤愈傷組織誘導最佳培養(yǎng)基為MS+3.0mg/L6-BA+0.5mg/LIBA;首先暗培養(yǎng)3w，切口處可誘導出少量

5、淡黃色愈傷，后于光照培養(yǎng)2w開始分化不定芽;下胚軸愈傷組織誘導實驗中下胚軸在各TDZ濃度均能100％誘導出愈傷，其中MS+0.05mg/LTDZ誘導的愈傷呈淡黃色，表面顆粒狀，繼續(xù)培養(yǎng)至60d，可以分化不定芽，將帶不定芽的下胚軸愈傷放入伸長培養(yǎng)基MS+0.6mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+5mg/LAgNO3可成功獲得理想高度植株;
　　 在直接誘導不定芽途徑中，正交實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，真葉葉盤在TDZ、6-BA、IBA三種激