紅茶和綠茶多酚與人唾液α-淀粉酶相互作用的酶促動力學(xué)和熒光猝滅研究.pdf

1、目的：本研究旨在通過紅/綠茶多酚(teapolyphenols，TP)對人唾液α-淀粉酶(humansalivaryα-amylase，HSA)的酶促動力學(xué)和熒光猝滅實驗，從HSA活性的改變和分子結(jié)構(gòu)的變化考察紅/綠茶TP與HSA相互作用的效果和特異性，從而為解釋紅/綠茶TP對口腔感覺的收斂性作用和口腔中茶源性色素沉著的生理意義奠定理論基礎(chǔ)。
　　 方法：在無抑制劑和紅/綠茶TP抑制劑下，用540 nm的不間斷波長檢測HSA催化

2、水解淀粉生成麥芽糖的吸光度，從而計算出反應(yīng)速度，由Lineweaver-Burk圖求出動力學(xué)參數(shù)：最大反應(yīng)速度(Vmax)、酶-底物解離常數(shù)(Ks)和酶-抑制劑解離常數(shù)(Ki)。統(tǒng)計分析參數(shù)間的差異并確定抑制類型。在285 nm(λex)的激發(fā)波長下，加入不同濃度的紅/綠茶TP溶液，觀察HSA的熒光強度變化。通過作出的熒光光譜圖計算Stem-Volmer猝滅常數(shù)(KSV)、雙分子猝滅常數(shù)(kq)、靜態(tài)猝滅常數(shù)(KS)、表觀靜態(tài)猝滅結(jié)合常

3、數(shù)(KA)和表觀靜態(tài)猝滅常數(shù)(K)以及其他熒光猝滅相關(guān)的參數(shù)，判斷紅/綠茶TP對HSA的熒光猝滅類型，統(tǒng)計分析紅茶和綠茶間熒光猝滅參數(shù)的差異。
　　 結(jié)果：紅/綠茶與無抑制劑Vmax之間的差異和綠茶抑制劑與無抑制劑Ks之間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，紅茶TP對HSA的抑制為非競爭性抑制型，綠茶TP對HSA的抑制為反競爭性抑制型；紅茶抑制劑Ks大于綠茶(P＜0.05)；而紅茶抑制劑Ki小于綠茶(P＜0.05)。熒光猝滅

4、中紅/綠茶TP的kq大于雙分子擴散限制性猝滅常數(shù)值(1×1010M-1s-1)，且伴隨紅/綠茶TP溶液濃度增加，熒光發(fā)射波長(λem)發(fā)生藍(lán)移，綠茶的藍(lán)移效果(18 nm)比紅茶(5 nm)強；紅茶為靜態(tài)猝滅，綠茶是以靜態(tài)猝滅為主的動靜態(tài)聯(lián)合猝滅；紅/綠茶TP分子與HSA分子上一個結(jié)合位點相結(jié)合(n=1)。紅茶和綠茶之間的熒光猝滅參數(shù)KS、KA和K均具有統(tǒng)計學(xué)的差異；紅茶猝滅劑的KS和K均大于綠茶(P＜0.05)，而紅茶猝滅劑的KA小于