BET蛋白抑制劑i-BET151抗肝癌作用的表觀遺傳學(xué)機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌是原發(fā)性肝癌最主要的類型，具有侵襲力強(qiáng)、易轉(zhuǎn)移、預(yù)后差、死亡率高等特點(diǎn)，研發(fā)新的高效靶向治療藥物具有重要意義。I-BET151為新型靶向BET蛋白小分子抑制劑，可抑制多種腫瘤的惡性表型，但其對肝細(xì)胞癌的作用尚未見報(bào)道。明確靶向BET蛋白小分子抑制劑I-BET151對肝細(xì)胞癌增殖等惡性表型的影響，闡明其調(diào)控肝癌關(guān)鍵原癌基因Yap1轉(zhuǎn)錄的表觀遺傳學(xué)機(jī)制，探討以正性組蛋白甲基化修飾為靶點(diǎn)的小分子化合物在肝細(xì)胞癌治療中的潛在應(yīng)用前景為本

2、文的研究重點(diǎn)。
　　本研究首先觀察了I-BET151對HCC細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡等方面的影響;其次明確了I-BET151對原癌基因Yap1的蛋白及轉(zhuǎn)錄水平的影響，并通過構(gòu)建穩(wěn)定干擾或瞬時(shí)過表達(dá)BRD4、siRNA沉默BET蛋白家族等研究手段，探討了BET蛋白家族對Yap1轉(zhuǎn)錄的調(diào)控作用;通過ChIP實(shí)驗(yàn)，明確了I-BET151對Yap1啟動子H3K79me2及H3K4me3等正性組蛋白修飾水平的影響，利用siRNA及靶向D

3、OT1L抑制劑EPZ004777沉默DOT1L等方法，證實(shí)了DOT1L介導(dǎo)的H3K79me2正性組蛋白修飾在肝細(xì)胞癌惡性增殖及Yap1轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的關(guān)鍵生物學(xué)作用。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明I-BET151可顯著抑制HCC細(xì)胞惡性增殖表型，誘導(dǎo)G1期細(xì)胞周期阻滯及凋亡;I-BET151可明顯抑制Yap1的轉(zhuǎn)錄，但對其蛋白穩(wěn)定性沒有明顯的影響;Yap1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控不依賴于BRD4，提示BRD2可能參與Yap1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控;I-BET151可明顯降

4、低Yap1啟動子H3K79me2正性組蛋白甲基化修飾水平，H3K79me2甲基轉(zhuǎn)移酶DoT1L的功能沉默可明顯抑制HCC細(xì)胞的增殖及Yap1的轉(zhuǎn)錄。
　　綜上所述，BET蛋白小分子抑制劑I-BET151通過抑制DOT1L介導(dǎo)的H3K79me2正性組蛋白甲基化修飾調(diào)控的原癌基因Yap1轉(zhuǎn)錄是其抗肝癌作用的重要分子事件。本研究闡明了I-BET151抑制肝癌關(guān)鍵原癌基因Yap1轉(zhuǎn)錄的表觀遺傳學(xué)機(jī)制，擴(kuò)展了對BET蛋白及甲基轉(zhuǎn)移酶DOT1