13170.b7h4靶向shrna干擾小鼠間充質(zhì)干細胞c3h10t12的構(gòu)建及其生物學功能的初步研究

1、碩士專業(yè)學位論文論文題目B7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細胞C3H10T12的構(gòu)建及其生物學功能的初步研究研究生姓名李楠指導教師姓名薛群專業(yè)名稱神經(jīng)病學研究方向神經(jīng)免疫論文提交日期2013年5月B7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細胞系C3H10T12的構(gòu)建及其生物學功能的初步研究中文摘要IB7H4靶向shRNA干擾小鼠間充質(zhì)干細胞系C3H10T12的構(gòu)建及其生物學功能的初步研究中文摘要目的：目的：構(gòu)建小鼠B7H4靶向shRNA

2、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的鼠間充質(zhì)干細胞株C3H10T12(以下簡稱C3H10)，通過體內(nèi)外實驗探討B(tài)7H4分子在C3H10細胞移植治療EAE中的免疫抑制作用。方法：方法：應(yīng)用流式細胞儀、Westernblot等方法檢測C3H10細胞中B7H4分子的表達情況；將裝載有小鼠B7H4分子小片段shRNA的慢病毒顆粒轉(zhuǎn)染C3H10細胞系(C3H10shRNAB7H4)；利用載體的嘌呤霉素抗性篩選轉(zhuǎn)染的C3H10細胞，通過熒光顯微鏡及流式細胞儀（FCM）檢測s

3、hRNA的轉(zhuǎn)染效率。通過流式細胞儀、RTPCR及Westernblot等方法檢測不同序列的特異性shRNA干擾C3H10細胞后B7H4分子的mRNA及蛋白表達水平，得到干擾效率較好的一株C3H10shRNAB7H4細胞，將其與小鼠脾臟淋巴細胞共同培養(yǎng)，用FCM檢測其對淋巴細胞增殖、細胞周期及細胞凋亡的作用。建立EAE小鼠模型，分假手術(shù)組、造模組、C3H10細胞移植組、C3H10shRNANC細胞移植組、C3H10shRNAB7H4細胞移

4、植組，其中C3H10細胞移植組、C3H10shRNANC細胞（轉(zhuǎn)染了未含靶向分子的對照shRNA的C3H10)移植組、C3H10shRNAB7H4細胞（轉(zhuǎn)染了含靶向分子B7H4shRNA的C3H10)移植組在免疫后第8天分別將C3H10細胞、C3H10shRNANC細胞、C3H10shRNAB7H4細胞注入建立的EAE模型小鼠體內(nèi)，觀察各組小鼠的發(fā)病神經(jīng)功能評分及體重變化情況，與對照組相比較。結(jié)果：結(jié)果：FCM及Westernblot檢

5、測顯示C3H10細胞高表達B7H4分子；熒光顯微鏡及FCM檢測顯示shRNA轉(zhuǎn)染C3H10細胞的效率高達80%以上；通過嘌呤霉素篩選后得到的C3H10細胞轉(zhuǎn)染效率在95%以上，且能穩(wěn)定傳代；有4對特異性shRNA對B7H4mRNA及蛋白均有不同程度的下調(diào)，其中以shRNA1對B7H4的下調(diào)作用最強，作為最佳特異性shRNA；C3H10能明顯抑制經(jīng)PHA激發(fā)的小鼠脾臟細胞的活化和增殖，使細胞周期阻滯于G0G1期，該免疫抑制效應(yīng)在PHA激發(fā)