小鼠干擾素λ3的表達及其生物學活性初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、根據(jù)氨基酸序列和受體的差異,干擾素(IFN)分為I型、II型和新發(fā)現(xiàn)并命名歸類的III型。IFN-λ3(又名IL-28B)是2003年發(fā)現(xiàn)的III型IFN-λ家族成員中的一員。跟其一起發(fā)現(xiàn)還有結構類似的IFN-λ1(又名IL-29)、IFN-λ2(又名IL-28A)。IFN-λ3基因結構與IL-10類似,氨基酸水平卻與IFN接近。小鼠的IFN-λ家族僅發(fā)現(xiàn)2個成員,即IFN-λ2和IFN-λ3。研究發(fā)現(xiàn)mIFN-λ3 mRNA表達于小鼠

2、血液細胞、肺、胰腺、胎盤、腦等多種組織中,其表達受病毒感染的外周血單個核細胞、樹突狀細胞和腫瘤細胞等的刺激誘導。
  自1957年IFN被發(fā)現(xiàn)以來,有關IFN的研究就不斷深入。I型IFN已被認可臨床應用于多種腫瘤和病毒性疾病的治療,但其療效往往很有限而且對于不同疾病差異較大,且常出現(xiàn)疲勞、發(fā)熱等不良反應。新發(fā)現(xiàn)的IFN-λs的功能與I型IFN相似,但其受體跟I型IFN的受體卻有所不同,極有可能替代I型IFN應用于臨床治療。IFN-

3、λs的受體在人體中的分布不同于I型IFN,使得其能選擇性作用于不同靶細胞、靶基因并發(fā)揮其獨特生物學活性。
  本研究用分子生物學技術構建小鼠IFN-λ3的原核及真核表達載體、進行原核和真核表達系統(tǒng)表達mIFN-λ3蛋白以及對其生物學功能的初步研究,為進一步研究其功能奠定了基礎。本文主要研究內容如下:
  一、根據(jù)GenBank中小鼠IFN-λ3基因序列(AY869696)設計特異性引物,用聚合酶鏈式反應(PCR)技術,克隆出

4、mIFN-λ3基因的全長編碼區(qū)。將其克隆入pcDNA3.1(+)載體,構建其真核表達載體pcDNA3.1(+)-mIFN-λ3。
  二、根據(jù)小鼠IFN-λ3基因序列設計出一對特異性引物,用PCR技術,從購置的表達克隆質粒(EX-Mm18539-M03)中克隆出mIFN-λ3成熟蛋白編碼區(qū),將其克隆入載體pET-44(+),構建原核表達載體pET-44-mIFN-λ3,經測序鑒定其編碼基因與GenBank中小鼠IFN-λ3基因序列

5、(AY869696)一致。將該表達載體轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中獲得表達菌株,然后在25°C用IPTG誘導,表達的融合蛋白以包涵體形式存在。
  三、利用已構建好的真核表達重組質粒pcDNA3.1-mIFN-λ3在293細胞中表達。使用MTT法檢測表達產生的mIFN-λ3目的蛋白對腫瘤細胞A549和SW620細胞的生長影響,并通過在A549、SW620細胞中誘導MxA抗病毒蛋白的產生研究mIFN-λ3的抗病毒機制。結果發(fā)現(xiàn)

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