ETV5在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的：
　　干細(xì)胞是一種能夠高度自我增殖、未充分分化不成熟的、具有再生為各種組織器官的細(xì)胞，醫(yī)學(xué)界稱為“萬用細(xì)胞”，隨著醫(yī)學(xué)研究不斷深入，干細(xì)胞移植治療已經(jīng)成為解決許多疑難雜癥的首要治療方式。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞作為臍帶來源的成體干細(xì)胞，具有來源方便、增殖迅速、存活時間長、不受倫理與道德約束等特點(diǎn)，是細(xì)胞替代治療的理想來源。我們前期實(shí)驗(yàn)研究了人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向生殖細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、癌細(xì)胞等細(xì)胞方向的誘導(dǎo)分化，但是對人臍帶間

2、充質(zhì)干細(xì)胞（HUMSCs）本身的分子調(diào)節(jié)機(jī)制暫未有具體的研究。ETV5作為ETS家族轉(zhuǎn)錄因子的一員，文獻(xiàn)報(bào)道ETV5在精原干細(xì)胞中能夠調(diào)控BCL6b、Lhx1、CXCR4的表達(dá)及癌細(xì)胞中調(diào)控FOXM1的表達(dá)而參與細(xì)胞增殖、細(xì)胞自我更新、腫瘤形成等過程，所以本實(shí)驗(yàn)旨在前期研究的基礎(chǔ)上，通過電轉(zhuǎn)染方式將ETV5 siRNA轉(zhuǎn)染HUMSCs，研究并探討ETV5在HUMSCs的生物學(xué)功能及其可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　通過小塊

3、組織貼壁法培養(yǎng)、擴(kuò)增HUMSCs，取第三代的HUMSCs，消化、計(jì)數(shù)后通過電轉(zhuǎn)染方式以每孔4×105細(xì)胞加3uM濃度的ETV5干擾RNA（siRNA）將其轉(zhuǎn)染HUMSCs并接種到6孔板中，電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs為實(shí)驗(yàn)組，僅單純電處理的 HUMSCs為對照組，培養(yǎng)箱培養(yǎng)48h后顯微鏡下觀察細(xì)胞生長融合度、消化計(jì)數(shù)并提取RNA，采用qRT-PCR檢測HUMSCs的ETV5 mRNA表達(dá)情況；qRT-PCR檢測BCL6b、

4、Lhx1、CXCR4、FOXM1 mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　顯微鏡下觀察電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs培養(yǎng)48h后細(xì)胞生長融合度約65％-70%，細(xì)胞計(jì)數(shù)平均約8×105，對照組顯微鏡下觀察細(xì)胞生長融合度約80%-85%，細(xì)胞計(jì)數(shù)平均約10.5×105，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；qRT-PCR結(jié)果顯示電轉(zhuǎn)染了ETV5 siRNA的HUMSCs培養(yǎng)48h后ETV5 mRNA表達(dá)水平較對照組下降

5、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；同時電轉(zhuǎn)了ETV5 siRNA的HUMSCs較對照組BCL6b、FOXM1 mRNA表達(dá)水平下降，而CXCR4、Lhx1 mRNA表達(dá)水平升高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　?、臜UMSCs通過電轉(zhuǎn)染ETV5 siRNA干擾ETV5表達(dá)，能抑制細(xì)胞增殖，說明ETV5在HUMSCs中能促進(jìn)細(xì)胞增殖。⑵在HUMSCs中，隨著ETV5 mRNA表達(dá)下降，BCL6b、FO