當歸多糖對點帶石斑魚非特異性免疫力的影響.pdf

1、當歸多糖(Angelica sinensis polysaccharide,ASP)對哺乳動物具有免疫調節(jié)作用,但對水產動物是否具有免疫調節(jié)作用尚未見報道。本文首先從中草藥當歸Angelica sinensis(Oliv.)Diels中提純當歸多糖,并對當歸多糖亞組分進行結構分析。然后通過喂食、腹腔注射和體外試驗研究當歸多糖對點帶石斑魚(EpinePhelus malabaricus)非特異性免疫力的影響,為當歸多糖在水產養(yǎng)殖上的應用提

2、供理論依據(jù)。
　　本論文主要研究內容和結論概況如下。用水煮醇沉法從中草藥當歸中提取當歸粗多糖,乙醇、丙酮脫色、Sevag法除蛋白質,透析、凍干得當歸多糖P0。將當歸多糖P0溶液用DE-52纖維素柱層析,依次用蒸餾水、0.1M NaCl、0.2MNaCl、0.4M NaCl洗脫得當歸多糖P1、P2、P3和P4四種亞組分。采用高效液相色譜、紅外光譜和甲基化法研究當歸多糖P1、P2、P3分子量和結構。結果表明:當歸多糖P1、P2、P3和

3、P4中蛋白質分別為2.21％、1.38％、2.53％和2.34％,總糖分別為95.10％、94.73％、81.68％和79.51％,還原糖分別為5.75％、4.85％、4.86％和4.77％。當歸多糖P1、P2、P3分子量分別為4.12x105Da,2.34～105Da和1.94～105 Da。當歸多糖P1、P2、P3的單糖組成分別為Glc:Xyl:Gal=18:3:1,GlcA:Glc:Xyl:Gal:7:8:3:2和Glc:Xyl=

4、28:1。當歸多糖P1、P2、P3的單糖殘基均為β構型的吡喃環(huán)。當歸多糖P1中Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當歸多糖P2中GlcAp為1→3連接,Glcp為1→3,6、1→3和1→連接,Xylp和Galp為1→3連接;當歸多糖P3中Glcp為1→6、1→4、1→3,6、1→3和1→連接,Xylp為1→3連接。
　　為研究當歸多糖對點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力的影響,將當歸多糖P0按0、

5、500、3000 mg/kg添加到飼料中,喂食點帶石斑魚4、8、12周后取樣。結果表明:當歸多糖P0能顯著提高點帶石斑魚血液白細胞吞噬能力,血清溶菌酶(LZM)活力,頭腎白細胞呼吸爆發(fā)活力、增殖活力和吞噬能力,降低Edwardsiella tarda攻毒后點帶石斑魚的累積死亡率。用3000 mg/kg的當歸多糖PO連續(xù)喂食12周,點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力最高。
　　將當歸多糖P0按0、500、3000 mg/kg添加到飼料

6、中,連續(xù)喂食101 d,研究當歸多糖P0對點帶石斑魚生長和非特異性免疫力的影響。結果表明:當歸多糖P0對點帶石斑魚攝食、生長、體表黏液抗菌活力、血清一氧化氮(NO)、總蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白(A/G)值影響不顯著(p＞0.05);低劑量的當歸多糖P0能顯著提高體表黏液LZM活力,而高劑量的當歸多糖P0能顯著提高血液白細胞數(shù)、NBT陽性細胞數(shù),并能提高血液白細胞吞噬率和血清LZM活力;當歸多糖P0能極顯著降低點帶石斑魚E. Tard

7、a攻毒后的累積死亡率,500、3000 mg/kg組的免疫保護率分別為45％、69％。
　　為研究當歸多糖亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力的影響,將當歸多糖P1、P2、P3按20 mg/kg體重的劑量腹腔點帶石斑魚,以當歸多糖P0做對照,以無菌PBS做空白,在注射前和注射后第3、7、14、21、28 d取樣。結果發(fā)現(xiàn):當歸多糖P0及其亞組分能顯著提高點帶石斑魚體表黏液LZM活力、血液白細胞數(shù)和NBT陽性細胞數(shù)、血清LZM活力、NO

8、含量和A/G值。當歸多糖P0能顯著提高點帶石斑魚體表黏液抗菌活力,而各多糖亞組分對黏液抗菌活力影響不顯著。當歸多糖P0及其亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力具有時間一效應關系:注射當歸多糖免疫指標升高,注射后28 d恢復到空白組水平。注射當歸多糖P0及其亞組分均能降低E. Tarda攻毒后點帶石斑魚的死亡率,注射當歸多糖P0組死亡率最低。單獨注射當歸多糖各亞組分對點帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當歸多糖P0。
　　為研究當歸多糖亞

9、組分對頭腎白細胞免疫活性的影響,用不同濃度(0、1、10、100、1000μg/mL)的當歸多糖亞組分P1、P2、P3體外孵育點帶石斑魚頭腎白細胞,以當歸多耱P0做對照,測定當歸多糖對白細胞增殖、呼吸爆發(fā)和吞噬能力的影響。結果表明:當歸多糖P0及其亞組分體外能提高點帶石斑魚頭腎白細胞增殖、吞噬和呼吸爆發(fā)活力。頭腎白細胞增殖和呼吸爆發(fā)活力隨當歸多糖P0及其亞組分劑量的增加而增強。當歸多糖P0(1000μg/mL)對增殖影響顯著。當歸多糖P

10、2(1-1000μg/mL)對呼吸爆發(fā)活力影響顯著。頭腎白細胞吞噬能力隨當歸多糖P0及其亞組分劑量的增加呈顯著的先升高后下降的趨勢。當歸多糖P、P1為100μg/mL時吞噬能力最高,當歸多糖P2和P3在10μg/mL時吞噬能力最高。
　　總之,當歸多糖P0及其亞組分P1、P2、P3通過提高體液和細胞免疫的方式提高點帶石斑魚非特異性免疫力和抗病力。各亞組分單獨作用時對點帶石斑魚非特異性免疫力的提高不及當歸多糖P0。當歸多糖亞組分在結