蓖麻矮化相關RcDof基因克隆及功能分析.pdf

1、蓖麻(Ricinus communis L.)是世界十大油料作物之一。矮稈蓖麻品種具有單產(chǎn)較高、適合密植和機械化收獲等優(yōu)點。Dof(DNA-binding with one finger)蛋白是植物特有的一類轉錄因子，在植物的生長發(fā)育過程中起重要作用，參與植物矮化的調控。本課題組在以往的研究中發(fā)現(xiàn)了一個鋅指蛋白RcDof基因，該基因在高矮蓖麻中差異表達。因此，本研究克隆了RcDof基因，轉化“通蓖5號”高稈蓖麻材料，獲得轉基因陽性植株，

2、對轉基因植株進行研究，分析該基因的功能，探討其矮化調節(jié)機制，為通過分子手段獲得蓖麻矮化新品種奠定基礎，也為Dof轉錄因子對植物矮化的影響研究提供理論依據(jù)。本試驗的研究結果如下：
　　1、以蓖麻RNA反轉錄的cDNA為模板，設計特異性引物，克隆得到RcDof基因，經(jīng)序列測定后，確認該基因全長為924bp。
　　2、利用雙酶切法，將RcDof基因和植物表達載體pCAMBIA1305.2線性化，經(jīng)連接、轉化和鑒定后獲得植物過表達載

3、體pCAM-RcDof-OE。利用中間載體pHANNIBAL獲得植物抑制表達載體pCAM-RcDof-RNAi。
　　3、通過農桿菌介導的遺傳轉化方法，將植物過表達載體pCAM-RcDof-OE和植物抑制表達載體pCAM-RcDof-RNAi轉入蓖麻子葉節(jié)受體，經(jīng)PCR檢測后，成功獲得轉基因蓖麻植株。
　　4、對野生型和轉基因蓖麻植株進行RcDof基因的轉錄水平分析。發(fā)現(xiàn)與野生型蓖麻植株相比，過表達轉基因蓖麻植株RcDof基

4、因轉錄水平增加，抑制表達轉基因蓖麻植株RcDof基因轉錄水平降低。
　　5、對野生型和轉基因蓖麻植株進行表型特征分析，觀察莖節(jié)細胞形態(tài)變化。發(fā)現(xiàn)與野生型蓖麻植株相比，過表達轉基因蓖麻植株株高降低、節(jié)間長度變短、莖節(jié)細胞面積減小，細胞數(shù)量增加；抑制表達轉基因蓖麻植株株高增加、節(jié)間長度變長、莖節(jié)細胞面積增大，細胞數(shù)量減少。
　　6、利用雙酶切法，將RcDof基因和亞細胞定位表達載體pCAMBIA1302進行雙酶切，經(jīng)連接、轉化和