蓖麻矮化相關(guān)基因GA2ox的克隆及其遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、近年來，隨著對蓖麻油需求的增大，研究者們對蓖麻的生產(chǎn)和加工的重視程度越來越高，蓖麻矮化遺傳育種成為人們研究的熱點(diǎn)。蓖麻矮化相關(guān)基因的發(fā)掘是蓖麻矮化分子育種的關(guān)鍵，對蓖麻遺傳育種具有重要意義。赤霉素(gibberellin，GA)作為一種重要的植物激素，在調(diào)節(jié)植株生長和發(fā)育過程中具有重要作用。有研究表明外施GA可以影響蓖麻植株的株高。赤霉素代謝途經(jīng)中的GA2ox可以影響GA的生物合成。為探究蓖麻RcGA2ox對蓖麻表型的作用機(jī)制，本研究以

2、通蓖5號（高稈蓖麻品種）和CRS268(矮稈蓖麻品種)為親本培育出來的BC2F2矮稈子代為材料，通過對RcGA2ox進(jìn)行篩選，克隆，轉(zhuǎn)化通蓖5號，獲得轉(zhuǎn)基因植株，鑒定轉(zhuǎn)基因植株，推測RcGA2ox的作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下:
　　1.通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，蓖麻RcGA2ox基因家族的三個(gè)基因，通過熒光定量PCR分析結(jié)果顯示，高矮稈植株中差異表達(dá)明顯的為: XM_002515190.2。
　　2.克隆了RcGA2ox基因，

3、測序結(jié)果通過BLAST比對，與已知序列相似度達(dá)到100％。
　　3.將RcGA2ox基因連接到pCAMBIA1305.2表達(dá)載體上，插入為點(diǎn)位為NcoⅠ和SpeⅠ，得到pCAMBIA1305.2-RcGA2ox表達(dá)載體;再通過液氮凍融法，將其轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)中。
　　4.通過蓖麻子葉節(jié)抗性篩選實(shí)驗(yàn)，確定了通蓖5號蓖麻的子葉節(jié)對HYG的抗性濃度為7mg/L;通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將pCAMBIA1305.2-RcGA2