苜蓿干旱誘導相關基因的克隆和功能分析.pdf

1、本試驗以公農三號根蘗型苜蓿為試驗材料。經過溫室條件下盆栽試驗和人為干旱條件的施加，用mRNA差異顯示技術分析干旱脅迫下苜?；虮磉_與正常供給水分的苜蓿基因表達的差異片斷。通過斑點雜交技術篩選得到的基因片斷，得到差異片斷后對其進行序列測定和分析等研究，得到以下結果： 1、由于苜蓿具有扦插易成活的特性，在溫室條件并且水分溫度控制適當的情況下，無性扦插苜蓿的成活率可以達到90％。故利用盆栽和無性繁殖得到同一株系的植株，采用不同的處理和

2、梯度來進行脅迫，并用分子生物學的方法進行分析，是對苜蓿進行基因表達研究一項可行的方案。這種方案比較對同一植株在逆境施加前后分別取樣來進行分析比較，尤其是當脅迫處理需要較長時間的時候或者試驗對象生命周期比較短的情況下，可以有效地降低由于生育階段改變而造成的假陽性。 2、苜蓿在進行一段時間的干旱脅迫后，會出現基因的差異表達。在對苜蓿進行半個月的萎蔫-復原脅迫。誘導苜?；蛑械目购祷虮磉_。通過RNA的提取和mRNA差異顯示技術篩選一

3、共得到苜蓿的差異表達片斷32條。干旱脅迫誘導了公農三號根蘗型苜?？鼓鏅C制的表達。 3、建立苜?；虿町惐磉_研究體系。理論上，通過簡并的3條錨定引物和8條隨機引物，即能夠覆蓋所有的mRNA，擴增出所有的mRNA片斷，本試驗利用3條錨定引物和10條隨機引物組合，通過DDRT-PCR方法研究正常和干旱脅迫下苜蓿的基因差異表達。并通過Reverse Northern雜交技術有效地篩選和排除DDRT-PCR技術得到的真、假陽性片斷。