不同季節(jié)不同生境下茶樹內(nèi)生真菌的多樣性分析.pdf

1、內(nèi)生真菌物種豐富且數(shù)量龐大，而且與其它生物之間具有緊密的生態(tài)關(guān)系，同時(shí)也是天然活性物質(zhì)的潛在來源。近年來，植物內(nèi)生真菌引起人們的廣泛關(guān)注，成為目前國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。相對于其他植物內(nèi)生真菌的研究情況，茶樹作為重要的經(jīng)濟(jì)作物，其內(nèi)生真菌的研究起步相對較晚。本研究以茶樹無性系品種龍井茶葉為材料，結(jié)合對真菌ITS區(qū)段的分子鑒定，首次對茶樹內(nèi)生真菌在不同生境、不同季節(jié)和不同的分離部位的種類與多樣性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，并分離鑒定出3個(gè)真菌新種

2、與1個(gè)茶樹內(nèi)生真菌的新記錄種。得到了茶樹內(nèi)生真菌16屬21種的ITS完整序列，并對茶樹內(nèi)生真菌的泌酸性進(jìn)行了初步的分析。主要研究成果如下：
　　 ⑴對內(nèi)生真菌的分離方法進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：僅使用酒精并不能對用于進(jìn)行內(nèi)生真菌分離的樣品完成表面消毒，而傳統(tǒng)使用升汞的滅菌方法的污染率控制很好，內(nèi)生真菌的分離能夠達(dá)到較好的效果。濃度為1.5％次氯酸鈉溶液是升汞的較好替代品，在1.5％次氯酸鈉溶液中，葉片浸泡3 min，莖段浸泡8 mi

3、n即可達(dá)到較好的消毒效果。實(shí)驗(yàn)中所采用的樣本接種方法對真菌可分離種類和數(shù)量不存在顯著影響，但切口與培養(yǎng)基接觸面積大的接種方式能夠使菌落生長更開展，從而有利于實(shí)驗(yàn)的后續(xù)進(jìn)行。
　　 ⑵本研究中分離得到的Melanconia sp.和Pleosporales sp.由于與其他已知真菌在ITS區(qū)段上存在較大差距，可能是與茶樹協(xié)同進(jìn)化的專性內(nèi)生真菌種類，在這里鑒定為新種。長盤孢屬真菌Glomerella sp.經(jīng)鑒定與已知長盤孢屬其他真

4、菌ITS區(qū)段差別在3％以上，也可以鑒定為新種。而座堅(jiān)殼屬真菌Rosellinia sp.則在茶樹內(nèi)生真菌中屬首次分離得到。
　　 ⑶茶樹內(nèi)生真菌的最大優(yōu)勢種為莖點(diǎn)霉屬Phoma真菌茶莖點(diǎn)霉Phomopsis sp4.，其次為盤長孢屬Gloeosporium的茶盤孢菌Glomerella sp.。此外脈孢菌屬Neurospora的粗壯脈紋胞菌Neurospora crassa和盤長孢屬Gloeosporium的膠孢炭疽菌Colle

5、totrichum gloeosporioides也是茶樹的優(yōu)勢內(nèi)生真菌種。而假尾孢屬Pseudocercospora的柿假尾孢Pseudocercospora kaki，擬莖點(diǎn)霉屬Phomopsis的Phomopsis sp1.和Phomopsis sp3.則為茶樹內(nèi)生真菌中的偶然種。
　　 ⑷林下茶園相對于非林下茶園有著更好的物種多樣性和更加良好的物種豐富度。但兩者的均勻度指數(shù)相近，兩者的種群也處于極高相似度水平。
　

6、　 ⑸在春季葉片和莖段的物種多樣性均好于冬季和秋季，冬季則略好于秋季，這一差別在莖段中更為明顯。葉片普遍比莖段有著更好的物種多樣性，但是這也不排除莖段中部分優(yōu)勢種在培養(yǎng)基中的長勢過快，從而抑制了某些長勢弱的真菌，導(dǎo)致了分離到的真菌種類偏少的結(jié)果。從均勻度指數(shù)來看，葉片和莖段在冬季均有較高的均勻度，而春季次之，秋季最低。各個(gè)季節(jié)內(nèi)，葉片的均勻度指數(shù)均略高于莖段。
　　 ⑹春茶采摘時(shí)期，茶樹莖、芽、葉中的內(nèi)生真菌群落相似性較低，可

7、能與內(nèi)生真菌的定植和轉(zhuǎn)移分別發(fā)生在不同的季節(jié)有關(guān)。
　　 ⑺不同的內(nèi)生真菌在茶樹的各部位存在一定的組織專化性。茶樹內(nèi)生芒果球座菌Guignardia mangiferae、綠色木霉Trichoderma viride、菌核青霉Penicilliumsclerotiorum和新發(fā)現(xiàn)種Pleosporales sp.在葉片中表現(xiàn)出較強(qiáng)的偏好性，而茶莖點(diǎn)霉Phomopsis sp4.、膠孢炭疽菌Colletotrichum gloeo

8、sporioides、棒形擬盤多毛孢Pestalotiopsis clavispora、茶盤孢菌Glomerella sp.和粗壯脈紋胞菌Neurosporacrassa則表現(xiàn)出較強(qiáng)的莖段偏好性。
　　 ⑻不同的內(nèi)生真菌對PDA液態(tài)培養(yǎng)基的pH值有不同的影響。但大多數(shù)真菌在培養(yǎng)的過程中會(huì)加重培養(yǎng)基的酸化，導(dǎo)致酸化最為嚴(yán)重的真菌菌株JF07和JF02屬于新種Melanconia sp.，YZ01和YZ02則是菌核青霉Penicil

9、lium sclerotiorum。相對與CK而言能夠較大提高pH值的幾個(gè)菌株分別是膠孢炭疽菌Colletotrichumgloeosporioides的菌株JF04，Phomopsis sp2.的菌株EF3和EF6，尖孢鐮刀菌Fusarium oxysporum的菌株JZ02，球毛殼菌Chaetomium globosum的菌株EF9，串珠狀赤霉Gibberella moniliformis的菌株ZH01，以及圍小從殼菌Glomere