貴州高羊茅內生真菌多樣性研究.pdf

1、高羊茅(Festucaarundinace)作為牧草使用時又稱葦狀羊茅，我國新疆、東北中部濕潤地區(qū)均有栽培，通常具有更為廣泛的適用性，屬優(yōu)良草坪草、牧草草種(牟瓊，2008)。吳佳海等(2006)從收集的野生高羊茅中采用改良混合選擇發(fā)培育出了株高適中、葉色墨綠、分蘗數(shù)多、綠期較長、抗逆性強、結實性佳、穗形緊湊適用于貴州的高羊茅品種黔草1號，這對喀斯特地區(qū)的草地建設、退耕還草、生態(tài)治理以及畜牧業(yè)的生產(chǎn)具有顯著的示范意義和經(jīng)濟價值。

2、　　禾草內生真菌(Grass Endophyte)，是指在禾本科草類植物體內完成其生活史的部分或全部，但又不引起任何病癥的微生物。禾草內生真菌普遍存在于在禾本科各類植株之中(Latch et al.,1989)，它們一方面寄居在禾草的細胞間隙營寄生生活；另一方面又可通過促進禾草的生長、增強禾草抗逆性來與寄生的禾草達成互惠共生關系(Li et al.，2007)。目前關于禾草內生真菌的相關研究主要集中在子囊菌門核菌綱肉座菌目麥角菌科香柱菌

3、屬(Epichlo?)及其無性型(Neotyphodium)之中，其中無性型(Neotyphodium)禾草內生真菌因其對禾草植物廣泛的侵染和特殊的作用，具有較高的科研價值(南志標等，2004)。
　　本研究通過對采自貴州境內，并種植于貴陽高羊茅資源圃內的高羊茅植株進行取樣，利用光學顯微鏡進行鏡檢觀察，以確定其內生真菌侵染情況，同時借助于組織切片染色技術研究高羊茅內生真菌的分布特點；再通過體外組織培養(yǎng)技術對內生真菌進行分離培養(yǎng)，并

4、對其進行形態(tài)、生理生化以及分子生物學鑒定，為今后高羊茅內生真菌及其宿主關系、利用內生真菌進行高羊茅育種的研究提供了重要的理論及技術依據(jù)。研究取得如下結果：
　　1.內生真菌定殖情況及組織分布特點
　　不同種類的高羊茅各組織內生真菌侵染率不同，但在內生真菌侵染率上，均呈現(xiàn)出相同的侵染趨勢，即：種子侵染率>莖節(jié)侵染率>葉鞘侵染率>葉片侵染率，其中種子侵染率約為35％，莖節(jié)侵染率約為21%，葉鞘侵染率約為18%，葉片的侵染率約為7

5、%。在樣品高羊茅的葉片、葉鞘、莖節(jié)之中，被觀測到內生真菌菌絲體普遍為：緊貼著細胞壁生長，多數(shù)平行于宿主細胞的長軸，偶見單行排列在細胞間隙中，粗細比較均勻幾乎沒有分叉，局部偶見彎曲，不穿透宿主細胞。內生真菌在葉片中沿著海綿組織的延長方向生長，且多在氣孔附近；在葉片和葉鞘中則較為稀疏，葉鞘中菌絲體沿著葉脈平行的方向排列，縱向生長；莖節(jié)間菌絲體靠近維管束，呈不規(guī)則的排列，且分布比較密集，常形成致密網(wǎng)狀。
　　2.高羊茅內生真菌的分離鑒定

6、
　　采用組織塊分離法確定了高羊茅各組織中內生真菌的最佳分離條件，并從3類高羊茅材料的600份組織塊中分離獲得229株內生真菌，分離率為38.17%，經(jīng)形態(tài)型合并，最終獲得了18株單一的絲狀真菌，經(jīng)過分子生物學、形態(tài)學和生理生化鑒定，這些真菌分屬香柱菌屬、曲霉屬和青霉屬真菌。
　　3.內生真菌侵染對低溫脅迫的抗性
　　通過鏡檢將實驗高羊茅區(qū)分為內生真菌侵染(EI)和未被內生真菌侵染(EF)的植株分開，并分別收集種子，采