銀杏內(nèi)生真菌多樣性及其活性研究.pdf

1、內(nèi)生真菌（endophytic fungi）是指那些在其生活史中某一段時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌，包括營表生的腐生真菌和對宿主暫時沒有傷害的潛伏性病原真菌和菌根菌。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，植物內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物具有抗真菌、抗腫瘤和抗氧化等作用，同時與宿主植物有一定的共生進化關(guān)系。這與植物內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，甚至可以產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的代謝產(chǎn)物有很大的相關(guān)性，因而對植物內(nèi)生真菌的研究是尋找

2、植物與內(nèi)生真菌的協(xié)同進化關(guān)系，同時又是一個尋找新天然產(chǎn)物的重要途徑。
　　 本課題以雌雄異株的藥用植物銀杏（Ginkgo biloba L.）為研究材料，對其內(nèi)生真菌的定殖率、種類組成、內(nèi)生真菌活性菌株的篩選及內(nèi)生真菌菌株目標(biāo)次生代謝產(chǎn)物的尋找方法等方面進行研究。取得如下結(jié)果：
　　 采用三步消毒法比較不同的次氯酸鈉表面消毒時間對內(nèi)生真菌分離的影響，最終確定最佳消毒條件。葉片的最佳消毒條件為：75％乙醇1 min，3％次

3、氯酸鈉1 min，75％乙醇0.5 min；75％乙醇1 min，5％次氯酸鈉3 min，75％乙醇0.5 min；銀杏樹皮最佳消毒條件為：75％乙醇1 min，5％次氯酸鈉5 min，75％乙醇0.5 min。
　　 銀杏內(nèi)生真菌具有較豐富的物種多樣性。從天目山和建德地區(qū)分別分離得到440株和382株內(nèi)生真菌。分別屬于9目、14科、19屬、28種和8目、10科、11屬、26種。天目山地區(qū)內(nèi)生真菌優(yōu)勢屬為Fusarium、Pho

4、mopsis、Alternaria、Bjerkandera、Phoma五個屬，建德地區(qū)的內(nèi)生真菌優(yōu)勢屬為Fusarium、Phomopsis、Diaporthe、Mucor、Pestalotiopsis五個屬，兩地共有的優(yōu)勢菌為Fusarium和Phomopsis兩個屬。
　　 從天目山采集的雌雄各20株銀杏的枝條及樹皮中共分離獲得805株內(nèi)生真菌菌株。其中，雄株銀杏分離得到內(nèi)生真菌416株，雌株銀杏分離得到內(nèi)生真菌389株，雄

5、株內(nèi)生真菌在定殖率和菌株個數(shù)上均高于雌株。通過比較雌、雄株銀杏中分離得到的內(nèi)生真菌發(fā)現(xiàn)如下特點：805個內(nèi)生真菌菌株中，Thichodermaatroviride和Leptosphaeria microscopica的分離頻率較高并且僅在雄株枝條上分離得到。從雄株上分離得到的Fusarium tricinctum明顯多于雌株，而從雌株上分離得到的Phomopsis fukushii明顯多于雄株。原因可能是由于雌株由于化學(xué)成分的不同會對內(nèi)

6、生真菌的生長和分布產(chǎn)生了一定的影響。
　　 根據(jù)形態(tài)鑒定的結(jié)果及對不產(chǎn)孢菌株形態(tài)型的劃分結(jié)果，選取56個銀杏內(nèi)生真菌的代表菌株對其發(fā)酵產(chǎn)物進行抗真菌及抗氧化活性的篩選。結(jié)果表明菌株發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯部位優(yōu)于水部位；共計9株（16.1％）內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物的乙酸乙酯提取物具有較好的抗白色念珠菌（Candida albicans）、新生隱球菌（Cryptococcus neoformans）、紅色毛癬菌（Trichophyton ru

7、brum）以及薰煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus）活性。其中，以從銀杏樹皮中分離得到的青霉屬T-1-2-1菌株發(fā)酵產(chǎn)物乙酸乙酯提取物的抗真菌活性最佳；采用DPPH法測定銀杏內(nèi)生真菌抗氧化活性，結(jié)果表明共計5株（8.9％）內(nèi)生真菌的抗氧化活性較好，其中，以毛殼屬T-3-2-2、炭角菌屬T-6-5-7菌株的抗氧化活性最好。以上結(jié)果表明，銀杏內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物具有良好的生物活性，有必要對其進行深入研究，以期從中發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎、