福建省豬圓環(huán)病毒2型分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、PCV-2可造成感染豬群的免疫抑制,降低豬群對(duì)其他疾病的抵抗力及對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答能力,容易并發(fā)或繼發(fā)其他疾病。目前,PCV-2在豬群中廣泛流行和傳播,已經(jīng)給全球養(yǎng)豬業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究為了解PCV-2在福建省豬群中的感染情況,采用TaqMan熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法對(duì)福州、龍巖、南平、寧德、莆田、泉州、三明、廈門、漳州等地的組織樣品進(jìn)行PCV-2病原學(xué)檢測。同時(shí)為了解福建省PCV-2流行毒株的遺傳變異情況,利用PCR技術(shù),以福州

2、、南平、漳州、寧化、上杭、福清、詔安部分發(fā)病豬組織樣品DNA為模板,分段擴(kuò)增PCV-2全基因組序列。PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆純化后,對(duì)目的片段進(jìn)行核苷酸序列測定,并利用DNAStar序列分析軟件,對(duì)9株福建流行株與GenBank國內(nèi)外PCV-2分離株進(jìn)行核苷酸序列及氨基酸序列同源性比對(duì)。上述研究所得結(jié)果如下:
　　 1.所有檢測豬場均存在不同程度的PCV-2感染,2008～2010年規(guī)模場發(fā)病豬中的PCV-2抗原陽性率分別為55.28％

3、(293／530)、62.26％(424／681)、72.1％(328／455)；散養(yǎng)戶的發(fā)病豬群中PCV-2抗原陽性率分別為67.14％(94／140)、72.08％(253／351)、81.00％(243／300)；臨床健康豬群中PCV-2抗原陽性率為40.47％(291／719)、45.34％(185／408)和80.61％(420／521)。PCV-2病原學(xué)調(diào)查顯示,我省豬群高度感染PCV-2,并呈逐年上升趨勢。
　　

4、2.本實(shí)驗(yàn)克隆測序獲得9株福建流行株,其中有4株基因組全長為1767 bp,5株長為1768 bp,與資料報(bào)道相符。9株福建流行株全基因組核苷酸同源性為95.8％～98.6％,與19株國內(nèi)外毒株的同源性為93.7％～99.5％。PCV-2基因組有三個(gè)主要開放閱讀框ORF1、O RF2和ORF3。9株P(guān)CV-2福建流行株與19株國內(nèi)外毒株的主要開放閱讀框核苷酸同源性依次為:97.0％～99.8％、88.6％～99.7％和96.2％～100

5、％。推倒的氨基酸同源性為97.0％～99.8％、76.5％～99.6％、90.5％～100％。
　　 3.9株福建流行株Cap蛋白氨基酸序列存在以下4個(gè)變異高頻區(qū):V1(52～90 aa)、V2(120～140 aa)、V3(60～170 aa)、V4(179～191 aa),其中前三個(gè)高變區(qū)域位于Cap蛋白主要抗原表位區(qū)。這些位點(diǎn)曝露于免疫壓力之下,在其他因素作用下可能會(huì)誘導(dǎo)變異成臨床致病力不同的新毒株。ORF3蛋白40～41

6、 aa及102～105 aa為變異高頻區(qū),可能會(huì)對(duì)病毒毒力產(chǎn)生影響。
　　 4.應(yīng)用MEGA5.03序列分析軟件,采用Neighor-Joining算法,可信度Bootstrap值設(shè)為1000,利用9株福建流行株與GenBank上獲取的其他45株P(guān)CV-2分離株的ORF2序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。系統(tǒng)發(fā)育樹分為PCV-2a、PCV-2b和PCV-2c三大分支,9株福建流行株中有4株為PCV-2a,5株為PCV-2b,未發(fā)現(xiàn)PCV-2c