福建省狂犬病流行病學(xué)及病毒學(xué)特征研究.pdf

1、目的: 近些年，我國(guó)人間狂犬病報(bào)告病例數(shù)呈遞增態(tài)勢(shì)，狂犬病已成為當(dāng)前重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)關(guān)于狂犬病流行病學(xué)、病原學(xué)的深入研究較少，整體資料不全，福建省這方面的研究更是薄弱，尚不清楚我省狂犬病毒主要宿主的病毒攜帶情況和免疫情況，不清楚居民對(duì)狂犬病的認(rèn)知程度及養(yǎng)犬情況等；國(guó)內(nèi)狂犬病毒街毒株的分離報(bào)道較少，尚未見(jiàn)在福建省境內(nèi)分離出狂犬病毒的報(bào)道，對(duì)福建省境內(nèi)狂犬病毒的流行毒株及其特征尚不清楚。因此，為了更好地預(yù)防和控制狂犬病，非常

2、有必要開(kāi)展系統(tǒng)的狂犬病流行病學(xué)研究，獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料，了解影響狂犬病發(fā)病率的主要因素；也很有必要進(jìn)行狂犬病毒流行毒株的分離鑒定、病原生物學(xué)和遺傳學(xué)特征的研究。因養(yǎng)犬?dāng)?shù)的增加導(dǎo)致犬傷患者也不斷增加，推進(jìn)和提高犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒的檢測(cè)方法也迫在眉捷。 方法: 1、針對(duì)狂犬病高發(fā)的實(shí)際情況，通過(guò)系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查研究，以獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料；從生態(tài)學(xué)角度收集影響狂犬病發(fā)病率有關(guān)因素的資料，通

3、過(guò)負(fù)二項(xiàng)回歸模型篩查出影響狂犬病發(fā)病率的主要因素。 2、運(yùn)用MIT和CIT法從疑似狂犬的腦組織中進(jìn)行狂犬病毒街毒株的分離與鑒定，采取分段RT-PCR的方法，對(duì)所分離的街毒株進(jìn)行序列擴(kuò)增、克隆、測(cè)序，拼接獲得全基因組序列，并運(yùn)用生物學(xué)軟件對(duì)基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析與比較； 3、通過(guò)收集福建省不同時(shí)間、不同地區(qū)的犬腦組織，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷，對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行N基因全長(zhǎng)的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序，結(jié)合疫情資料進(jìn)行狂犬病的分子流行病學(xué)研究。

4、 4、選取CTN株狂犬病毒糖蛋白富集表位基因片段進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化，人工獲得狂犬病毒糖蛋白抗原，為探索犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒檢測(cè)方法的提高奠定基礎(chǔ)。 結(jié)果： 1、從2000～2006年福建省每年均有人間狂犬病疫情發(fā)生，平均發(fā)病率為0.07/10萬(wàn)。2002～2006年福建省人狂犬病報(bào)告病例，各地分布不一，夏秋季節(jié)發(fā)病相對(duì)較多，病例主要集中在30～60歲之間，男性多于女性，農(nóng)民發(fā)病人數(shù)最多。 2、

5、福建省3個(gè)調(diào)查地區(qū)的平均家庭養(yǎng)犬率約為46.67％，人均養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為0.13只，每家養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為0.63只。家犬平均免疫率為5.54％。 3、福建省普通群眾對(duì)狂犬病的認(rèn)知情況較差，狂犬病專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員，總體對(duì)狂犬病犬傷情況處理的知識(shí)水平較高。 4、研究認(rèn)為狂犬病的發(fā)病率與犬的免疫率及普通群眾狂犬病知識(shí)認(rèn)知能力有關(guān)。犬免疫率每增加1％，5年累積發(fā)病率為原來(lái)的79％即下降了21％。普通群眾狂犬病知識(shí)認(rèn)知能力平均每增加0.1分，5年

6、累積發(fā)病率為原來(lái)的80％即下降了20％。 5、本研究通過(guò)RT-nested-PCR法從表觀健康犬腦組織中檢測(cè)出狂犬病毒，并經(jīng)基因測(cè)序證實(shí)表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 6、首次在福建省成功分離出狂犬病毒街毒株(7株)，并完成其中兩株(FJ008、FJ009)的生物學(xué)特性和全基因組序列測(cè)定。 7、從福建省各地收集的犬腦組織標(biāo)本共89份，通過(guò)RT-nested-PCR擴(kuò)增、純化、克

7、隆，獲得19條包含N基因完整讀碼框的序列。根據(jù)核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸的同源性高低，把19份含有RABV RNA的標(biāo)本分為三個(gè)群組，a群組包括：FJ001、FJ002、FJ003、FJ012、FJ013、FJ014；b群組包括：FJ008、FJ009、FJ010、FJ011、FJ015、FJ016、FJ017、FJ018、FJ019；c群組包括：FJ004、FJ005、FJ005、FJ007。各群組內(nèi)部RABV N基因的核苷酸同源性在99.

8、70～100％之間，群組間RABV N基因的核苷酸同源性在86.43～89.28％，各群組內(nèi)部RABV N基因的氨基酸同源性在98.86～100％之間，群組間RABV N基因的氨基酸同源性在95.33～98.44％。結(jié)合標(biāo)本來(lái)源地，證實(shí)福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征。 8、福建省狂犬病的流行毒株與目前常用的各種疫苗株N基因序列比對(duì)同源性在86.47～98.89％之間，均屬于基因Ⅰ型，提示目前使用的疫苗能較好地保護(hù)福建省RAB

9、V流行毒株的感染。 9、完成了重組質(zhì)粒pHTb-624的高效表達(dá)和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應(yīng)用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測(cè)，與市場(chǎng)上主流試劑盒檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應(yīng)用價(jià)值。 結(jié)論： 1、福建省近些年狂犬病高發(fā)，居民養(yǎng)犬眾多，犬免疫率低下，普通群眾狂犬病相關(guān)知識(shí)薄弱。犬免疫率低下及普通群眾狂犬病相關(guān)知識(shí)薄弱是福建省狂犬病高發(fā)的主要影響因素。 2、首次在福建省

10、成功分離出7株狂犬病毒街毒株，并完成其中兩株街毒株(FJ008、FJ009)的生物學(xué)特性和全基因組序列測(cè)定。 3、完成福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和分子流行病學(xué)研究。證實(shí)福建省存在表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒的現(xiàn)象，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力證據(jù)。雖然福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征，本研究發(fā)現(xiàn)福建省狂犬病的流行毒株與目前使用的各種疫苗株N基因序列比對(duì)同源性在86.47～98.89％之間，均屬于基因Ⅰ型，目前使用的疫苗還是可