我國(guó)部分地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV2）可引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎與腎病綜合征（PDNS）、豬呼吸道疾病綜合征（PRDC）、豬先天性振顫、母豬繁殖障礙、豬增生性和壞死性肺炎等疾病。PCV2病毒在國(guó)內(nèi)外廣泛流行，造成豬的生長(zhǎng)遲緩，飼料報(bào)酬降低，PCV2感染主要造成機(jī)體的免疫抑制，從而引起機(jī)體的繼發(fā)感染而造成其它疾病的發(fā)生，給世界養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。PCV2根據(jù)抗原性及基因

2、組組成不同，可分為兩種血清型，PCV1和PCV2。普遍認(rèn)為PCV1沒(méi)有致病性，但其廣泛存在于豬群中，目前普遍認(rèn)為PCV2存在兩種基因型PCV2-1（PCV2-422基因型）和PCV2-2（PCV2-321基因型）即為PCV2b和PCV2a。在美國(guó)、加拿大等及一些歐洲國(guó)家PCV2a和PCV2b兩種基因型均存在。
　　 通過(guò)鑒別PCV2a和PCV2b兩種基因型的PCR方法對(duì)我國(guó)湖南、湖北、河南、山東、上海、重慶、浙江、福建、安徽、廣

3、東、遼寧11個(gè)省（市）235份PCV2陽(yáng)性樣本（肺、心、腎、腦、腹股溝淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)等）進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果10份病料為PCV2a基因型，檢出率為4.2％；133份病料為PCV2b基因型，檢出率為56.6％。通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查，說(shuō)明PCV2a和PCV2b兩種基因型已在我國(guó)廣泛流行，并且PCV2的流行毒株主要以PCV2b基因型為主，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)還有不能分型的PCV2存在。
　　 本實(shí)驗(yàn)利用PCR技術(shù)對(duì)PCV2全基因組進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增來(lái)

4、自湖南、湖北、浙江、河南、山東、廣東的PCV2陽(yáng)性樣品的核苷酸序列，將擴(kuò)增片段克隆在pMD18-T載體，經(jīng)氨芐青霉素抗性篩選，PCR及限制內(nèi)切酶ClaⅠ和HindⅢ雙酶切鑒定，獲得37個(gè)不同PCV2株全基因組片段的陽(yáng)性重組質(zhì)粒。對(duì)目的片段進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定，擴(kuò)增片段大小為1767bp和1768bp，與資料報(bào)道相符。利用BioEdit和DNAStar序列分析軟件，對(duì)選擇具有代表性的11條PCV2全基因序列（已登錄到GenBank）與Gen

5、Bank國(guó)內(nèi)外的PCV2毒株序列進(jìn)行同源性分析比對(duì)并繪制系統(tǒng)發(fā)育樹，表明各毒株之間同源性為94.3％～99.7％，PCV2a毒株同美國(guó)分離株EU594437和日本分離株AB426905同源性很高，分別為96.7％～99.0％，PCV2b毒株同中國(guó)分離毒株FJ158606和EU647557同源性很高為98.6％～99.5％。通過(guò)ORF2基因氨基酸序比較，發(fā)現(xiàn)ORF2編碼的衣殼蛋白氨基酸存在3個(gè)區(qū)域53～92aa、121～136aa、190