藥理實(shí)驗(yàn)給藥量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

1、1. 重復(fù) ：目的：驗(yàn)證在類似的條件是否可獲得結(jié)果的重現(xiàn)性以及結(jié)果的變異情況 。要點(diǎn)：A.確定適當(dāng)?shù)臉颖緮?shù)。B.各組動物數(shù)目盡量相同。按動物類型確定樣本數(shù)：（1）小動物：計(jì)量>10例;計(jì)數(shù)>30例（2）中等動物：計(jì)量> 8 ;計(jì)數(shù)> 20例（3）大動物5-10例,2. 隨機(jī)： 目的：（1）避免非研究因素影響。（2） 除研究因素外，提高各比較組的其他因素的均衡性、可比性。（3）滿足統(tǒng)計(jì)

2、學(xué)假設(shè)檢驗(yàn)的要求。,抽簽隨機(jī)法：例：30只小鼠，要求隨機(jī)分為3組：可先將30只小鼠按1至30編號，做1-30號簽，充分混合號簽后，隨機(jī)各取10枚為一組。,隨機(jī)數(shù)字表法：,B組:順序號: 2， 3， 5， 7， 10， 11，隨機(jī)號: 08， 18， 27， 38， 90， 16 余數(shù): 2, 0, 0, 2, 0, 1調(diào)整

3、后各組的編號 :A 組：1， 9，12，13， 15 B 組：2， 5，7， 10， 11 C 組: 3，4， 6， 8， 14,3. 對照,（1） 正常對照組（空白對照、陰性對照） （2）模型對照組 （3）陽性對照組 意義：①檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)體系是否可靠 ②粗略估計(jì)受試藥與對照藥相比，作用強(qiáng)度與特點(diǎn)上有哪些差異。,（4）假手術(shù)對照組 有時可以替代正常對照 （5）自身對照

4、 觀察同一個體給藥前、后的區(qū)別 .,第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)動物選擇,1、符合醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物標(biāo)準(zhǔn) 一級：普通動物（亦稱常規(guī)動物或無疾病的動物）；二級：清潔動物（飼養(yǎng)在溫度恒定，普通設(shè)施中的動物，飼料、墊料，用具均經(jīng)過高壓消毒）；三級：無特殊病原體動物（specific-pathogen free , 簡稱SPF動物）；四級：無菌動物（機(jī)體內(nèi)外均無任何寄生蟲的動物，一般是臨產(chǎn)前按無菌手術(shù) 剖腹取出胎仔，在無菌條件下用無菌飼

5、料繁養(yǎng)獲得的動物）。,2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇敏感種系 心血管系統(tǒng): 大鼠貓、犬、小型豬等。 體溫：兔 嘔吐實(shí)驗(yàn)：鴿、貓或狗等。 免疫：純種小鼠 原則:選擇對藥物的反應(yīng)與人體相近的種系。,3、性別 ：根據(jù)要求選擇 用一種性別比兩種性別兼用所得結(jié)果離散度較小。 4、年齡體重 ： 每批動物的體重，年齡越接近越好 通常：小鼠:18-22g，大鼠:200±25g， 豚鼠

6、:250-300g，兔、貓:1.5-2Kg, 犬:10-15kg。 大鼠、小鼠:6-8周齡,4、數(shù)量 ：計(jì)量研究：小鼠每組>10只 大鼠每組>8只 豚鼠或兔每組>6只 豬或狗>5只 計(jì)數(shù)研究：小鼠每組>30只

7、 大鼠每組>20只,5.習(xí)性:小鼠、大鼠均為群居動物，不宜單獨(dú)飼養(yǎng)。,第三節(jié) 受試藥,1.制備情況：（1）新藥受試藥要求：用處方固定，質(zhì)量穩(wěn)定、工藝、質(zhì)控指標(biāo)恒定后的中試產(chǎn)品。（2）一般受試中藥：生藥經(jīng)鑒定科屬種清楚；提取制備工藝明確，含量確定（以生藥量或有效組分含量表示）。（3）中藥單體：化學(xué)結(jié)構(gòu)式清楚。,2、給藥途徑,實(shí)驗(yàn)的給藥途徑與臨床擬使用的途徑一致。 中藥粗制劑一般不用注射給

8、藥或體外實(shí)驗(yàn)的方法檢測藥物效應(yīng) 。,3、給藥時間,預(yù)防性給藥：治療給藥：,4、劑量：,劑量組數(shù)：新藥研究至少設(shè)3個劑量組。 三者最好成等比，能反應(yīng)量效關(guān)系。 給藥容量相等，濃度不等。 合理選擇劑量： （1）參考LD50：在LD50的1/10、1/20、1/40等范圍內(nèi)設(shè)置高、中、低劑量組。 （2）根據(jù)臨床用藥等效量計(jì)算 ：,不同種類動物等效用藥量的計(jì)算,應(yīng)用舉例：①某復(fù)方的總藥量是60g/劑，每天

9、1劑。按實(shí)驗(yàn)動物與人用藥量折算表計(jì)算 ，200g重大鼠等效量是多少？200g重大鼠等效量為：60g×0.018=1.08g/只，或： 60g÷56＝1.07g/只,人的每公斤體重給藥量為：60g÷70=0.857g/Kg。大鼠每公斤的給藥量是：1.08g×1000/200=5.4g/Kg 按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，大鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的5.4g/Kg÷0.857g/Kg=6.

10、3（倍）。,②如同一復(fù)方要用小鼠實(shí)驗(yàn)，小鼠每只的給藥量為：60×0.0026＝0.156g/只；0.156÷20/1000=7.8 g/Kg；按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，小鼠的劑量應(yīng)為人用劑量的7.80g/Kg÷0.857g/Kg=9.1（倍）。,③豚鼠應(yīng)用量為60÷31.5=1.90g/只；1.90÷400/1000=4.762g/Kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，豚鼠的劑量為人用量

11、的4.762÷0.857＝5.56（倍）。,④兔：60÷14.2＝4.225g/只；4.225÷1.5＝2.81 6g/Kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，兔的劑量應(yīng)為人用量的2.816÷0.857＝3.287（倍）。,⑤狗用量為60g÷3.1＝19.35g/只；19.35÷12=1.61g/Kg。按體重計(jì)算，要達(dá)到等效，狗的給藥量應(yīng)為人的1.61÷0.857＝

12、1.88（倍）,噻嗪類,不同種類動物間用藥劑量換算表（轉(zhuǎn)換因子 計(jì)算法）,某利尿 中藥250g重大鼠的有效量為250 mg/kg，試計(jì)算15kg犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量？犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量＝ 250 mg/kg×6.9÷22=78.4mg/kg,不同種類動物間用藥劑量換算表（體表面積/kg體重 比值法）,某利尿 中藥250g重大鼠的有效量為250 mg/kg，試計(jì)算15kg犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量？犬的等效實(shí)驗(yàn)劑量＝ 2

13、50 mg/kg×0.16÷0.47=85.1mg/kg,（3）根據(jù)文獻(xiàn)估計(jì)劑量 如有相關(guān)的藥物，相似的復(fù)方，其使用劑量可作為參考。 （4）通過預(yù)試估計(jì)劑量,5．給藥容量：小鼠口服： 0.1ml-0.25ml/10g 最大不超過0.4ml/10g 其他途徑不超過0.25ml/10g。大鼠：10ml/kg, 不超過2.0ml/100g其他途徑不超過1.0ml/100g.,藥物溶液配置,例：戊巴比妥鈉對小

14、鼠腹腔注射的有效的麻醉劑量為40mg/kg?，F(xiàn)有體重為20g左右的30只小鼠要麻醉。試問要稱量多少克的戊巴比妥鈉，設(shè)計(jì)的給藥容量為多少，配成怎樣濃度 ？,藥物溶液配置,答：稱量戊巴比妥鈉30mg，加生理鹽水至7.5ml, 使?jié)舛葹?mg/ml, 小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。或：稱量戊巴比妥鈉40mg，加生理鹽水至10ml, 使?jié)舛葹?mg/ml, 小鼠腹腔注射0.1ml/10g(即10ml/kg)。,第四節(jié)

15、對照藥,①合法性：《中國藥典》收載或符合部頒標(biāo)準(zhǔn)，或新批準(zhǔn)合法生產(chǎn)的藥物。②可比性：其功用、主治、劑型（給藥途徑）與受試藥相似。特殊情況下，在合理范圍內(nèi)可適當(dāng)靈活掌握。③擇優(yōu)選用：有多種同類藥可供選用時，應(yīng)擇優(yōu)選用公認(rèn)療效較好的藥物。,選擇的陽性對照藥要注意有無批準(zhǔn)文號。如：麝香保心丸：國藥準(zhǔn)字Z31020068生產(chǎn)單位：有效期：必須用有效期內(nèi)產(chǎn)品。恬爾心注射用：國藥準(zhǔn)字（2001）J53號：進(jìn)口藥品注冊證號：BX2001

16、0122）復(fù)方丹參注射液：滬衛(wèi)藥準(zhǔn)字（1995）第014021號,第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)條件控制,減少時間差異：動物生理活動有其晝夜節(jié)律，如小鼠夜間活動增加，白天活動減少。最好每批實(shí)驗(yàn)在每天相同的時間測定。減少溫度差異：室溫穩(wěn)定、適宜。飲食控制：有些實(shí)驗(yàn)需對動物禁食。,第六節(jié) 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)處理和結(jié)果分析,(一)極端數(shù)據(jù)（outliers）的處理 ：避免差錯形成極端數(shù)據(jù)。對可疑數(shù)據(jù)及時復(fù)測或復(fù)核,及時糾正差錯。在x±3s 之外

17、數(shù)據(jù)，可考慮舍棄。否則不應(yīng)隨便舍棄 -根據(jù)《新藥（西藥）臨床藥研究指導(dǎo)原則匯編（藥學(xué)、藥理學(xué)毒理學(xué)）》,(二)數(shù)據(jù)表達(dá) ：一般應(yīng)至少有3位有效數(shù)字，標(biāo)準(zhǔn)差至少有2位有效數(shù)字，均數(shù)的小數(shù)位數(shù)應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)差相同，出示的結(jié)果應(yīng)包括均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差，例數(shù)，P值情況（大于、小于、或具體P值）數(shù)字的精確度要與測量儀器所能達(dá)到的精確度一致。,(三)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)避免的差錯：1.量反應(yīng)資料： (1) 兩組間實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較常用t檢驗(yàn) （unp

18、aired t test）。,T值計(jì)算公式（通式）,,下列情況兩組間比較不能使用t檢驗(yàn): ①方差不齊改用校正t值法（即t’檢驗(yàn)）。方差齊性檢驗(yàn)：▲如兩組的標(biāo)準(zhǔn)差相差一倍以上時不必檢驗(yàn)，即可判斷為方差不齊。,▲通過計(jì)算，當(dāng) F>F0.05 時可判斷為方差不齊。(式中S較大者為S1、n1，較小者為S2, n2)。F0.05也可通過可查“方差齊性檢驗(yàn)F值表”獲得（注：與“方差檢驗(yàn)F值表”不同）。,如：有兩組數(shù)據(jù),需

19、統(tǒng)計(jì)有無顯著差異：甲組：11.5，14.1，12.3, 10.8，13.0, 13.2, 13.9 12.3, 10.6 x±s：12.41±1.26(n=9) 乙組：10.0, 11.9, 12.0, 12.8, 14.9, 17.4, 19.3, 20.2, 23.1 x±s: 15.73±4.48(n=9)查無應(yīng)舍數(shù)據(jù)。有無方

20、差不齊：F=4.48×4.48/(1.26×1.26)=12.64 F0.05≈1.2+8/9+14/(9-3)=4.422F>F0.05 說明兩組方差不齊，用t’檢驗(yàn)。,方差不齊時的校正t’值 計(jì)算公式,甲組：11.52±1.3 2(n=9) 乙組：15.73±4.48(n=9)按上式計(jì)算 t’=2.142 f’=9.501

21、 f=10時 t0.05=2.228 f= 9時 t0.05=2.262因此,甲、乙兩組間無顯著差異。但以“t”檢驗(yàn)，上述兩組數(shù)據(jù)f=9+9-2=16f=16 時 t0.05=2.120 ，將得出:兩組數(shù)據(jù)有顯著差異的錯誤結(jié)論。,EXCEL軟件T檢驗(yàn)過程： 選中fx →T TEST→顯示填寫框：,Array 1 B2:

22、B11 Array 2 C2:C11 Tails 2 Type 3 Tails 用于定義返回的分布尾數(shù):1代表單尾；2代表雙尾 Type 用于定義t檢驗(yàn)的類型: 1代表成對檢驗(yàn)；2代表雙樣本等方差假設(shè)；3代表雙樣本異方差假設(shè)。,Array1    為第一個數(shù)據(jù)集。Array2    為第二個數(shù)

23、據(jù)集。Tails    指示分布曲線的尾數(shù)。如果 tails = 1，函數(shù) TTEST 使用單尾分布。如果 tails = 2，函數(shù) TTEST 使用雙尾分布。Type    為 t 檢驗(yàn)的類型。1成對檢驗(yàn)2等方差雙樣本檢驗(yàn)3異方差雙樣本檢驗(yàn),②數(shù)據(jù)明顯偏態(tài)時,不能用“t”檢驗(yàn)，不用x±s表達(dá)。（改用中位數(shù)檢驗(yàn)，用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)法。如Mann-Whitney

24、秩和檢驗(yàn)，等級和檢驗(yàn)，序值法等）。偏態(tài)簡便判斷法A：如均數(shù)兩側(cè)之差大于2×√n時不用檢驗(yàn)，即可判斷為明顯偏態(tài)。（如 ：15.1, 17.9 , 18.2 , 14.3 , 16.5 , 19.7 , 18.6 , 17.4 , 18.1, 40.8, 38.9。 x±s＝21.41±9.26， n=11, 均數(shù)左邊9位、右邊2位，均數(shù)兩側(cè)之差為7，大于2×√11=6.63, 上述一組數(shù)值為偏

25、態(tài)，不可用正態(tài)檢驗(yàn)。,偏態(tài)簡便判斷法B:用公式R＝4 × n – D2 ，D為均數(shù)兩側(cè)例數(shù)之差，n為例數(shù)，如R為負(fù)，表示數(shù)據(jù)肯定為偏態(tài)。如上述一組數(shù)據(jù):R＝4×11 - 7×7= -5, 表示數(shù)據(jù)肯定為偏態(tài)。,又如一組數(shù)據(jù)總數(shù)為50例，大于均數(shù)35例，小于均差15例。R＝4×50－（35－15）× （35－15） ＝200－400＝－200，此組數(shù)據(jù)為偏差。③如有不定值（

26、如>30，<10等）不用t檢驗(yàn)，改為中位數(shù)表達(dá)，用非參數(shù)統(tǒng)計(jì)法。如Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)，等級和檢驗(yàn)，序值法等。,(2) 配對資料t檢驗(yàn)：（paired t test）,適用情況：①同一批受試對象試驗(yàn)前后的配對數(shù)據(jù)。②同一批受試對象身體兩個部位試驗(yàn)測得的數(shù)據(jù)。③同一批受試對象用兩種檢驗(yàn)方法的測試的結(jié)果。檢驗(yàn)方法：t=（x/s） ×√n,,,,如某次對中藥提取物的降壓實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下（1pKa=7.50

27、06mmHg）：用藥前: 12.0, 14.0, 13.0, 18.0, 16.0, 15.0, 15.0, 19.0 x±s＝ 15.3±2.4用藥后: 10.0, 11.0, 13.0, 16.0, 13.0, 14.0, 13.0, 17.0

28、 x±s＝ 13.4±2.3差值： 2.0, 3.0, 0 2.0, 3.0, 1.0 2.0, 2.0, x±s＝ 1.87±0.99 (n=8)配對t檢

29、驗(yàn) ： t=（1.87/0.99） ×√8=5.357 p<0.01而如果直接將給藥前后的均數(shù)進(jìn)行比較，兩者間并無顯著差異。,但進(jìn)行配對t檢驗(yàn)時，要確信除待分析的因素外，其他可控條件盡量一致。否則可分別取配對變化值或變化率;求均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差．同時設(shè)對照組，同樣處理后，再進(jìn)行兩組間的t檢驗(yàn)，這樣更能提高檢驗(yàn)效率。,例：某藥給藥2周前后血壓變化如下，問該藥有無降壓作用？組1 大鼠血壓

30、 （x±smmHg)給藥前180 165 190 200 192 158 175 185 178 180.3±13.3給藥后150 140 170 160 159 130 145 153 155

31、 151.3±11.9變化 30 25 20 40 33 28 30 32 23 29.1±6.0 t=（19.1/

32、6）×3=9.55 f=9-1=8, t0.01=3.355 p< 0.01,在本例自身對照（自身前后配對）實(shí)驗(yàn)時，同一個體在經(jīng)歷一段時間后（如2周），即使不作任何處理（給藥），所得指標(biāo)也可能有變化，為鑒別該組血壓變化是否為非藥物因素引起，實(shí)驗(yàn)時宜設(shè)立一個平行對照組進(jìn)行比較。這樣就有實(shí)驗(yàn)組觀察前后和對照組觀察前后4組數(shù)據(jù)?？煞謩e求出給藥組和對照組的變化值（差值）或變化率及標(biāo)準(zhǔn)差，再進(jìn)行兩組間的t檢驗(yàn)。如：,組2

33、　大鼠血壓　　　　　　　（x±s　mmHg)給對照液前 175 165 195 205 150 145 180 171 176 　　　　　　　　　　　　　　　　　173.6±19.2給對照液后 160 155 185 190 145 145 171 162 165 　　　　　　　　　　　　　　　　　 164.2±15.8血壓變化 15 1

34、0 10 　 15 5 0 　 9 9 11 　　　　　　　　　　　　　　　　　　9.3±4.7配對t檢驗(yàn)：t=（9.3/4.7）×3=5.936；f=9-1=8, t0.01=3.355 P<0.01,兩組原始值間比較 ：給藥前：給藥組： 180.3±13.3(n=9) 對照組：173.6±19

35、.2(n=8) t=0.860 p>0.05給藥后：給藥組： 151.3±11.9 對照組： 164.2±15.8 t=1.957 p>0.05,兩組差值組間比較： 組1： 給藥前后差值： 29.1±6.0 組2：給對照液前后差值 9.3

36、77;4.7 t=7.794 f=16, t0.05=2.120 t0.01=2.921 p<0.01,(3)方差分析（analysis of variance, ANOVA),有時用某藥的不同劑量與同一對照組比較，并同時要分析不同劑量作用有無區(qū)別時，構(gòu)成了多組均數(shù)的組間比較，此時常使用單因素方差分析。使用方差分析時，仍然要首先考慮各組樣本是否符合正態(tài)分布，方差是否齊性，若符合方可進(jìn)行分

37、析，計(jì)算F值，分析總體是否有差異。若有，再進(jìn)行組間兩兩比較，此時常用Q檢驗(yàn)，(student-newman-keuls test)，也可用t檢驗(yàn)。,計(jì)量資料統(tǒng)計(jì)方法的選擇,2. 質(zhì)反應(yīng)資料,又稱計(jì)數(shù)資料。有時機(jī)體對藥物的反應(yīng)只有“是”或“否”兩種，如用藥后動物死與不死。翻正反射的存在或消失，某種病理癥狀（如驚厥）出現(xiàn)或不出現(xiàn)等，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以是百分比或自然比，其顯著性檢驗(yàn)一般采用卡方檢驗(yàn)（2×2法）。,有效 無效

38、 總計(jì) 有效率——————————————————甲藥 35(a) 15(b) 50(a+b) 70% 乙藥 25© 25(d) 50(c+d) 50%——————————————————總計(jì) 60(A+c) 40(b+d) 100(n),四格表的自由度恒等于1。0.05的機(jī)率點(diǎn)為

39、3.841 。X20.05, 兩藥作用無顯著性差異。,樣本較小（兩組總數(shù)<40例）或數(shù)據(jù)中有0或1時：不用卡方檢驗(yàn)，而用精確概率法或簡化直接概率法。例：使用甲藥16例中5例出現(xiàn)不良反應(yīng)，使用乙藥16例無不良反應(yīng)，兩藥有無區(qū)別？,上式p=5!27!16!16!/5!0!11!16!32! =0.0217結(jié)論：乙藥的不良反應(yīng)小于甲藥，兩者有顯著差異。,,注：本例如用卡方檢驗(yàn)X2＝(80-0.5x32)2x32/(

40、5x27x16x16) =3.793, X2 0.05 結(jié)論出現(xiàn)差錯。,3.等級資料: 可以認(rèn)為是一種有序的計(jì)量資料，它包括：時反應(yīng)資料，如潛伏期，凝血時間。病變程度及臨床療效按等級分組的資料，如－、＋、Ⅱ、Ⅲ或痊愈、顯效、好轉(zhuǎn)、無效等。兩端確切數(shù)據(jù)不明的分組資料，如血清滴度>1：40，1：80，1：60，<1：320等。這些資料不宜用均數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)差作常規(guī)的統(tǒng)計(jì)分析，可用等比差

41、值法，等級序值法，秩和法，及Ridit法等非參數(shù)統(tǒng)計(jì)分析。,(四)常用統(tǒng)計(jì)軟件包SAS（statistics analysis system）由美國SAS軟件有限公司研制并發(fā)行已有30多年的歷史，該軟件采用窗口菜單或命令方法或交互方式選擇各種統(tǒng)計(jì)方法，適合統(tǒng)計(jì)專業(yè)人員使用。SPSS(statistical package for the social seience),version12,由美國SPSS公司研制。,BMDP(biom

42、edical computer programs)由美國BMDP統(tǒng)計(jì)軟機(jī)公司研制，由多個功能模塊組成，采用交互式，圖形界面設(shè)計(jì)操作較直觀，方便、較適宜于醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)。新藥開發(fā)權(quán)威統(tǒng)計(jì)軟件Drug and statistics,(五)結(jié)論:經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，要有結(jié)論，要注意的是:①判斷結(jié)果不能絕對化。例如，判斷兩組差別有顯著性時，一般按P≤0.05而拒絕“檢驗(yàn)假設(shè)”的。P<0.05的意思是說，如果“檢驗(yàn)假設(shè)”成立，僅僅由于抽樣誤差造成

43、如此大的差別的概率根?。≒<0.05）而已，并不是說“檢驗(yàn)假設(shè)”絕對不能成立，當(dāng)然P越小越有理由拒絕“檢驗(yàn)假設(shè)”。,精品課件！,精品課件！,②與專業(yè)知識相結(jié)合：指的是即使P<0.05兩者有顯著差異，還要考慮專業(yè)知識方面有無意義。如降血壓藥，用了2周后，血壓下降5mmHg，P<0.05，但是這個藥還是沒什么應(yīng)用價值。又如抗腫瘤藥，用藥組較對照組對小鼠實(shí)體瘤重抑制率為20％，P<0.05, 但從專業(yè)角度來看，僅對瘤重