中藥血清藥理學(xué)以及實驗設(shè)計思路

1、中藥血清藥理學(xué)以及實驗設(shè)計思路,中藥血清藥理學(xué),中藥血清藥理學(xué)是將中藥或中藥復(fù)方經(jīng)口服給動物灌服一定時間后采集動物血液、分離血清，用含有藥物成分的血清進(jìn)行體外實驗的一種半體內(nèi)實驗方法。,血漿是指血液中除血球、血小板之外的部分, 是一種無色透明的液體, 含有水、無機(jī)鹽、營養(yǎng)物、激素、尿酸等。血清是指血漿中除去纖維蛋白后得到的淡黃色液體, 在血液凝固后才能分離出來。凝血是指凝血酶與纖維蛋白原相作用生成纖維蛋白, 再與血球結(jié)合而使血液發(fā)

2、生凝固的現(xiàn)象。,血漿 血清 凝血,血漿 血清 凝血,,,無凝血直接離心的為血漿；有凝血再離心的為血清。,優(yōu) 點,防止中藥粗制劑理化性質(zhì)對體外試驗的干擾,反映藥物的代謝產(chǎn)物和給藥后產(chǎn)生的內(nèi)源性成分,便于從細(xì)胞分子水平闡述藥物的作用機(jī)制,體外實驗條件可控性強(qiáng)、藥物效應(yīng)易于檢測,,,體外培養(yǎng)體系藥物濃度與血藥濃度不確定,藥效最佳的采血時間難以確定,血清藥理學(xué)方法增加了分析藥物成分的難度,成分復(fù)雜，影響因素太多，結(jié)果重復(fù)性差

3、,含藥血清滅不滅活，方法不統(tǒng)一,無去除血清影響的理想措施,無確定的最佳給藥方案,缺 點,中藥血清藥理學(xué)步驟,實 驗 動 物 的 選 擇,給 藥 劑 量,含藥血清的處理與保存,給 藥 方 案,采 血 時 間,血 清 添 加 量,,,,,,實驗動物的選擇,,動物種類：大鼠、家兔、豚鼠,動物數(shù)量,雌雄是否各半,正常生理狀態(tài)與病理狀態(tài),實 驗 動 物 的 選 擇,給藥劑量,給 藥 劑 量,臨 床 常 用 量,給

4、 藥 劑 量,給 藥 劑 量,,,,,,,給藥方案,灌胃次數(shù)和時間間隔：各種給藥方式都是為了使藥物達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度，從而便于藥物作用和機(jī)理的研究。由于中藥及其復(fù)方化學(xué)成分復(fù)雜，半衰期很難測定，所以采用7～10d 給藥法也是權(quán)宜之計。當(dāng)然，若是進(jìn)行藥物血清時效關(guān)系的研究，給藥方法又另當(dāng)別論。,采血時間,理想的采血時間應(yīng)落在血藥濃度的高峰期。李儀奎通過對96個藥物達(dá)峰時間統(tǒng)計后提出藥后1~ 2h采血較為合理。最可靠的方法是

5、先通過對少量動物進(jìn)行預(yù)實驗，根據(jù)不同的實驗要求，將不同時間的采集的含藥血清進(jìn)行實驗比較，再確定采血時間。,含藥血清的處理與保存,藥物血清處理：滅活與否？ ①丙酮法； ②乙醇法 ；③加溫法。 目前采集動物血清后，多用加溫法， 經(jīng)56℃，30min滅活。含藥血清的保存: -20 ℃或更低溫度環(huán)境下保存。,血清添加量,藥物血清加入量的逐漸增加，其藥理效應(yīng)曲線是呈正態(tài)分布狀。研究含藥血清的加入量來評價血清中藥物的真

6、實有效濃度。設(shè)立正常血清空白對照組來排除血清本身所含干擾性物質(zhì)對實驗結(jié)果的影響。,根據(jù)實驗的要求選擇動物，以及必要的藥理造模；優(yōu)選含藥血清的制備方法（采用正交試驗法等）：以藥物和觀察指標(biāo)不同，需要首先對含藥血清的時效和量效進(jìn)行研究，以便確定給藥方案 、采血時間 、血清或血漿、滅活與否、血清添加量。,實驗設(shè)計思路,復(fù)方黃連注射劑血清藥理學(xué)研究 以大白兔為實驗動物，采用肌內(nèi)注射復(fù)方黃連注射劑，2次/d，連續(xù)3d。末次給藥

7、后15 、30 min，1、2、3 h后從兔頸靜脈取血，分離含藥血清。采用反相高效液相色譜法測定含藥血清中小檗堿含量，用微量稀釋法和藥敏紙片法測定復(fù)方黃連注射劑含藥血清的抑菌能力。結(jié)果復(fù)方黃連注射劑含藥血清對耐藥性金葡菌具有明顯的抑制作用。,實驗設(shè)計思路,茵陳蒿湯保肝作用的血清藥理學(xué)研究 建立CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝細(xì)胞損傷細(xì)胞模型，SD 大鼠為含藥血清供體，以含藥血清對損傷肝細(xì)胞增殖(WST-8法)的影響為指標(biāo)，采用正交試驗

8、法優(yōu)選含藥血清的制備方法，并確定體系中血清添加量。 以動物是否造模、取血時間、取血成分為考察因素，每個因素設(shè)2個水平，選用L4(23)正交表安排試驗。,實驗設(shè)計思路,實驗設(shè)計思路,,,,黃連解毒湯抗氧化作用的血清藥理學(xué)研究 采用血清藥理學(xué)方法，研究黃連、黃芩、黃連解毒湯含藥血清對氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的時間-效應(yīng)關(guān)系；并研究黃連、黃芩、黃連解毒湯提取物和小檗堿、黃芩苷純品對氧化損傷保護(hù)作用的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

9、 黃芩的含藥血清滅活與否抗氧化作用有很大差異，兩者的時-效曲線上也有明顯不同。血清添加量過大，會有假陽性結(jié)果，造模難以成功。本實驗中以5% 濃度血清造模，較為成功。,實驗設(shè)計思路,荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清體外抗病毒的實驗研究 荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清對MDCK細(xì)胞的最大無毒濃度 TC0 均為5%，即在相應(yīng)培養(yǎng)基中血清含量為5%。荊芥、桂枝揮發(fā)油含藥血清5%、3.5%、2.5%濃度對10 TCID50的甲型流感