hla基因檢測修改稿

1、長沙能潤醫(yī)學檢驗所鄧鵬,HLA 基因檢測,Table of Contents,Table of Contents,什么是HLAMHC、HLA、亞型、關聯什么是HLA分型 I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經內科疾病，骨科疾病等,基本概念,人類白細胞抗原h(huán)uman leukocyte antigen , HLA,MHC,Major h

2、istocompatibility complex，,主要組織相容性復合體,（包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、 SLA、RLA、GpLA、B等）,1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗發(fā)現：決定小鼠間移植排斥與否（即組織相容性）的基因位于17號染色體短臂命名為組織相容性-2（H-2）,H-2是一個由許多緊密連鎖的基因位點構成的復雜系統(tǒng),1950年代Dausset經

3、產婦血清進行個體之間抗體與白細胞凝集和細胞毒試驗發(fā)現人的MHC，命名為HLA 基因位于第6號染色體短臂,1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠對一些抗原的免疫應答能力比較發(fā)現：控制機體對不同抗原的免疫應答能力的基因（Ir基因）位于MHC基因復合體內。,Benacerraf、Dausset和Snell三位科學家分別從不同角度對MHC的免疫遺傳學進行的開拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫(yī)學和生理獎。,HLA共

4、分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細胞、巨噬細胞和活化T細胞中；III型分子為補體系統(tǒng)，包括C2和C4位點，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細胞、某些細胞毒性T細胞和白細胞中。,HLA分型,HLA基因系統(tǒng)的多態(tài)性及一些主要基因座位的等位基因數正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個，共

5、2 320個等位基因。  圖中所示為常見基因座位的等位基因數。及一些主要基因座位的等位基因數正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個，共2 320個等位基因。  圖中所示為常見基因座位的等位基因數。,HLA分型的基本檢測方法： 細胞學方法測抗原特異性（型） 血清學方法測抗原特異性（型） （微量淋巴細胞毒試驗）

6、 分子生物學方法測等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代測序 PCR/流式細胞儀,HLA抗原和等位基因命名:,

7、用血清學及細胞學方法檢測抗原特異性: HLA-B27, HLA-DR4（血清學方法） HLA-DPw2（細胞學方法）用分子生物學方法檢測等位基因： HLA-DRB1*04 05,HLA-B*27 07,例如HLA-B27,HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B

8、*2706HLA-B*2707,HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*2723,Loci Considered to be Matched,,,,,,,,,,,,,,,A,C,B,DR,DQ,DP,4 M bp,Father’s,Mother’s,HLA: 無血源相關 10/10

9、 同胞兄妹 單倍型全相合，半相合 父母親 半相合,17,臍血干細胞移植,,外周血干細胞移植,,骨髓干細胞移植,,常見HLA與疾病關聯疾病 HLA抗原 相對風險—————————————————————————強直性脊椎炎

10、 B27 89.8Behcet綜合征 B51 10-15多發(fā)性硬化癥 DR2 4.8乳糜瀉 DR3 10.8Grave’s病 DR3 3.7系統(tǒng)性紅斑狼瘡 DR3

11、 5.8類風關 DR4 4.2胰島素依賴型糖尿病 DR3/DR4 25.0重癥肌無力 DR3 2.5,小結,HLA的三個特性使其成為熱點：決定組織相容性 高度多態(tài)性與疾病關聯,Table of Contents,HLA 基因分型,低分辨: SSP,rSSO Luminex bead

12、 for class I & class II,中等分辨HLA分型,24,Next generation sequencing,高分辨高通量HLA分型,Illumina Sequencing by Synthesis (SBS) chemistry,MiSeq,Pacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing,27,Sequencing based typing

13、 (SBT),高等分辨HLA分型,Sanger 測序原理,Sanger 測序原理,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,A,,5’,,3’,A,C,G,T,A,C,G,dNTP,ddNTP- Dyes,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,A,T,A,G,

14、C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,T,G,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,C,T,G,A,A,C,A,C,G,T,A,C,G,T,,,Sanger 測序原理,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3

15、’,,5’,T,A,T,C,G,A,,5’,,3’,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,

16、C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,C,T,G,A,A,C,,,,,,HLA分型模板的擴增,Long PCR (each: HLA-A, -B, -C, -DR, -DQ, DP, MICA)2. Amplicons (PCR: exon + loci),Long PCR to amplify the target gene,www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.120661

17、4109,Assembly and Alignment,Problems in sequence assembly,Amplicons - HLA Coverage,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,HLA-A,HLA-B,HLA-C,HLA-DQB1,HLA-DPB1,HLA-DQA1,HLA-DRB1,HLA-DRB3,HLA-DRB4,HLA

18、-DRB5,,,,,,,,,,,,,,,HLA-DPA1,,,,,,,,,,,,,,,,,,,4.1kb,2.6kb,4.2kb,10.3kb,9.7kb,7.3kb,7.1kb,4.1kb,Table of Contents,AS的病因,基因有關：HLA-B27的轉基因大鼠成功地培育出強直性脊柱炎的動物模型。目前已發(fā)現包括B27在內的3種基因與此病相關；并且有明顯家族發(fā)病傾向。免疫有關：MHC，T-Cells感染有關：相關學說認為

19、，來自尿道、前列腺、精囊的抗原經Batson循環(huán)到達骶髂關節(jié)、脊柱和眼睛等部位而發(fā)生相關病變，解釋了男性好發(fā)的原因。,AS的經典檢查,體征： 骶髂關節(jié)炎檢查：“4”字試驗、骶髂關節(jié)壓迫試驗、髂棘推壓試驗、骨盆擠壓試驗附著點炎檢查：坐骨結節(jié)、肋軟骨、肋胸關節(jié)、恥骨聯合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗、指地距、枕墻距、胸廓活動度等,骶髂關節(jié),AS的經典檢查,B27測序的AS檢查,HLA-B27與AS,患病率：0.3%，

20、20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關節(jié)（骶髂關節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關節(jié)及關節(jié)外表現，嚴重者發(fā)生脊柱畸形和關節(jié)強直B27檢測可作為有相關癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類型！,HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標志。,連鎖不平衡學說分子模擬學說關節(jié)源性肽假說其他：T細胞受體庫

21、假說超抗原假說B27修飾因子假說Cys67模型,B27抗原與某些G（-）菌之間存在類似的分子結構，能發(fā)生分子模擬或交叉反應，機體免疫系統(tǒng)把B27當作病原體抗原產生免疫應答，對機體產生免疫損害。,認為關節(jié)源性肽只存在于關節(jié)組織中，特異性地由HLA—B27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應T細胞處于耐受狀態(tài)；當某些具有同源結構蛋白的病毒或細菌感染時，則可致敏耐受的T細胞，從而識別以低水平遞呈的關節(jié)源性肽，引起自身免疫反應而損傷組織。,長

22、沙能潤醫(yī)學公司的優(yōu)勢,長沙能潤醫(yī)學成立于2010年，專注于：基因資源與基因檢測、腫瘤基因研究與轉化、免疫細胞治療和存儲。為醫(yī)療機構、制藥與健康體檢公司提供特色精準醫(yī)學解決方案。 集團旗下擁有以下業(yè)務版塊：基因檢測、細胞治療、生物培訓、生物雙創(chuàng)項目投資、精準醫(yī)療科研。集團還參股投資了免疫診斷試劑國家工程實驗室、國家基因檢測技術示范中心、智慧醫(yī)院工程建設公司燕通生物、海南樂城合家精準醫(yī)療醫(yī)院等機構。與中科院、中南大學湘雅醫(yī)

23、學院、湖南師大醫(yī)學院及斯坦福、猶他、華盛頓、UAB、耶魯等大學教授合作共建實驗室。 在未來，集團將以“基因科技服務健康”為宗旨，以雙創(chuàng)平臺為基礎，以基因細胞技術系統(tǒng)為主導，系統(tǒng)模塊化，模塊產品化為策略，整合產、學、研、金、用資源，努力成為杰出的精準醫(yī)學服務提供商。,公司基因檢測實力雄厚，與中南大學湘雅醫(yī)學院百人計劃鄒義洲教授長期合作，有3臺ABI3730測序儀，1臺Luminex, 公司員工80%具有碩士及碩士以上學