高效液相色譜儀原理及應用實驗指導書

1、高效液相色譜儀原理及應用實驗指導書高效液相色譜儀原理及應用實驗指導書貴州大學精細化工研究開發(fā)中心（綠色農(nóng)藥與生物工程重點實驗室）1.實驗類型：實驗類型：設(shè)計型實驗（研究性實驗）2.課時安排課時安排：6課時3.實驗目的和意義實驗目的和意義：通過學習高效液相色譜儀的構(gòu)成和使用方法，及其在定性、定量分析中的應用，培養(yǎng)學生嚴謹?shù)目茖W態(tài)度、細致的工作作風、實事求是的數(shù)據(jù)報告和良好的實驗習慣（準備充分、操作規(guī)范，記錄簡明，臺面整潔、實驗有序，良好的

2、環(huán)保和公德意識）。培養(yǎng)培養(yǎng)學生的動手能力、理論聯(lián)系實際的能力、統(tǒng)籌思維能力、創(chuàng)新能力、獨立分析解決實際問題的能力、查閱手冊資料并運用其數(shù)據(jù)資料的能力以及歸納總結(jié)的能力等。4.實驗原理實驗原理高效液相色譜分離是利用試樣中各組分在色譜柱中的淋洗液和固定相間的分配系數(shù)不同，當試樣隨著流動相進入色譜柱中后，組分就在其中的兩相間進行反復多次（103106）的分配（吸附－脫附－放出）由于固定相對各種組分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各組份在

3、色譜柱中的運行速度就不同，經(jīng)過一定的柱長后，便彼此分離，順序離開色譜柱進入檢測器，產(chǎn)生的離子流信號經(jīng)放大后，在記錄器上描繪出各組分的色譜峰。5.實驗設(shè)備實驗設(shè)備高效液相色譜儀、色譜柱、容量瓶、分析實驗室常用玻璃儀器、甲醇等色譜純試劑，超純水，濾膜。農(nóng)藥標準品。6.實驗內(nèi)容：實驗內(nèi)容：了解并初步掌握高效液相色譜儀的基本原理與構(gòu)造；了解高效液相色譜儀常用的幾種檢測器工作原理和使用范圍；學習高效液相色譜法分離化合物和檢測化合物的含量的方法；通

4、過測定對樣品的定性、定量測定，初步掌握獲得高效液相色譜譜圖和數(shù)據(jù)的一般操作程序與技術(shù)；學習樣品制備的方法；了解影響分析測定的重要因素，學會優(yōu)化分析條件；學習譜圖和數(shù)據(jù)的處理方法。1)樣品制備樣品制備過程中，要同時考慮將被分析的樣品中，可能干擾欲測組分定量的物質(zhì)盡可能的分離出去。當欲測組分含量很低時，還要考慮通過樣品制備使欲測組分在試驗樣品中的含量得以提高，便于進行色譜分析。2)定性、定量方法農(nóng)藥制劑的高效液相色譜分析農(nóng)藥制劑的高效液相色

5、譜分析一、目的要求、目的要求1、了解高效液相色譜儀和二極管陣列檢測器(DAD)的使用范圍、原理和使用方法。2、掌握高效液相色譜含量測定方法和方法學的考察。3、本方法的適用性，適用于生產(chǎn)過程和實驗過程中中間體和產(chǎn)物含量跟二、基本原理二、基本原理大部分的農(nóng)藥能在紫外可見光區(qū)有吸收，因此選擇高效液相色譜（配DAD檢測器）對上述兩種化合物進行分離，定性定量測定。三、儀器與試劑三、儀器與試劑儀器：高效液相色譜儀（配DAD檢測器）；C18反相柱；容

6、量瓶。試劑：甲醇（色譜純），超純水，濾膜。農(nóng)藥標準品。四、試驗步驟四、試驗步驟1.色譜條件：色譜柱，EclipseXDB反相柱（4.6150mmi.d.）；流動相，甲醇：水（70:30vv），檢測波長，212nm；流速，1mLmin；柱溫，25?C。2.標準溶液的配制準確稱取一定量的農(nóng)藥標準品，置于25ml容量瓶中，用流動相溶解，定容，配制成標準溶液。3.樣品的配制準確稱取一定量的農(nóng)藥制劑樣品(精確至0.000lg置于25mL容量瓶中，