終點(diǎn)顯色法試劑盒的臨床應(yīng)用

1、新北診斷試劑盒（內(nèi)毒素、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖檢測(cè)試劑盒）終點(diǎn)顯色法臨床運(yùn)用,1,目錄,2,3,企業(yè)簡(jiǎn)介鱟試劑介紹及臨床上的運(yùn)用 細(xì)菌內(nèi)毒素試劑盒 真菌檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 與臨床現(xiàn)有試劑盒方法比較 檢測(cè)方法分類(lèi)及第四代顯色基質(zhì)法意義,1.基本情況： 1）福州新北生化工業(yè)有限公司創(chuàng)立于1995年，由留學(xué)歸國(guó)學(xué)者丁友玲創(chuàng)辦； 2）公司為生產(chǎn)鱟試劑及其配套產(chǎn)品的高新技術(shù)企業(yè)。

2、 3）現(xiàn)公司占有3500平方米清潔廠房（1000平方米為局部百級(jí)，整體萬(wàn)級(jí)），擁有年產(chǎn)1000萬(wàn)人份的臨床檢測(cè)試劑盒與5000萬(wàn)支鱟試劑的生產(chǎn)流水線 4）公司于2015年取得福建省醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證及藥品生產(chǎn)許可證；,一、企業(yè)簡(jiǎn)介,丁友玲女董事與J·Levin教授,丁友玲董事日本留學(xué)與導(dǎo)師照,丁友玲董事與田中重則,田中重則，日本生化工業(yè)株式會(huì)社首席研究官，終點(diǎn)顯色法試劑盒產(chǎn)品首創(chuàng)者,巖永貞昭（左邊），日本鱟

3、血研究世界權(quán)威，顯色基質(zhì)理論的發(fā)明者,J·Levin教授于1965年發(fā)明鱟試劑用于檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素,總經(jīng)理,市場(chǎng)部,后勤保證部,研發(fā)部,生產(chǎn)部,品保部,2.公司架構(gòu),細(xì)胞離心設(shè)備,冷凍干燥器,工人正在操作封口機(jī),生產(chǎn)區(qū)域潔凈區(qū)走廊,3、公司核心競(jìng)爭(zhēng)力及歷年榮譽(yù),公司取得的5項(xiàng)國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利及15項(xiàng)實(shí)用新型專(zhuān)利： 1）抗干擾鱟試劑的制備工藝 （專(zhuān)利號(hào)：2003101057615） 2） 隧道式干熱滅菌設(shè)備測(cè)試試用內(nèi)毒素

4、指示劑的制備方法 （專(zhuān)利號(hào)：ZL 2005102000276） 3）一種臨床檢測(cè)試劑的制備方法 （專(zhuān)利號(hào)：ZL 2005102000280) 4）(1-3)-β-D-葡聚糖的精制方法（專(zhuān)利號(hào)：ZL 2012100760693) 5）一種除液體中熱源的凝膠及其制備方法和應(yīng)用 （專(zhuān)利號(hào)：ZL 201410457

5、5879）,,2004年以來(lái)公司被評(píng)為福建省高新技術(shù)企業(yè)； 2006~2008年主要獎(jiǎng)勵(lì)：福建省科技進(jìn)步三等獎(jiǎng)； 第十六屆全國(guó)發(fā)明展覽會(huì)銀獎(jiǎng)； 海峽兩岸職工創(chuàng)新成果金獎(jiǎng) ；福州市科技進(jìn)步一等獎(jiǎng)、二等獎(jiǎng)；福建省巾幗發(fā)明專(zhuān)利獎(jiǎng)等； 2015年建立省級(jí)院士專(zhuān)家工作站； 2015年取得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證及體外診斷試劑的注冊(cè)證； 第四代細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒、真菌（1-3）-β-D葡

6、聚糖檢測(cè)試劑盒（終點(diǎn)顯色法）為國(guó)內(nèi)首創(chuàng)；,二、鱟試劑簡(jiǎn)介,中國(guó)鱟 (Tachypleus tridentatus )海洋節(jié)肢動(dòng)物；俗稱: 鴛鴦魚(yú),夫妻魚(yú),馬蹄蟹。,主要原料是鱟血細(xì)胞中的變形細(xì)胞；鱟試劑是變形細(xì)胞中提取的蛋白酶凍干制品；,鱟血遇氧變藍(lán),1885年美國(guó)的W.H.Howell發(fā)表了一篇有關(guān)鱟血的化學(xué)組成和凝集方面的研究成果，可以說(shuō)是鱟試劑研究的開(kāi)端。1956年美國(guó)科學(xué)家Bang和Levin發(fā)現(xiàn)美洲鱟血液加入革蘭氏陰性菌時(shí)

7、會(huì)產(chǎn)生凝膠。1964年Levin和Bang提出了鱟血凝集的初步機(jī)理。（Levin是我司的顧問(wèn)）1968年正式建立了鱟試驗(yàn)方法；1980年被美國(guó)藥典采納代替兔法檢測(cè)藥品中細(xì)菌內(nèi)毒素。1979 年福建省藥品檢驗(yàn)所丁友玲（現(xiàn)任我司董事長(zhǎng)）、劉端華首先在國(guó)內(nèi)研制成功鱟試劑。82年中試成功，獲衛(wèi)生部重大成果甲級(jí)獎(jiǎng)。80年代日本生化工業(yè)株式會(huì)社與和光純藥株式會(huì)社將鱟試劑制備成試劑盒，應(yīng)用于臨床檢測(cè)人血液中的內(nèi)毒素。,,鱟試驗(yàn)法的確立,鱟

8、試劑在臨床檢測(cè)上的應(yīng)用,（終點(diǎn)顯色基質(zhì)法）,一、細(xì)菌內(nèi)毒素試劑盒臨床運(yùn)用二、真菌檢測(cè)試劑盒臨床運(yùn)用,一、細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒在臨床的應(yīng)用,,1.細(xì)菌內(nèi)毒素概念： a.革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分脂多糖（LPS）， 也就是細(xì)菌內(nèi)毒素； b.大多數(shù)致病原細(xì)菌為革蘭氏陰性細(xì)菌。本法能快 速檢測(cè)血液中細(xì)菌內(nèi)毒素在臨床上具有重大意義；2.檢測(cè)的目標(biāo)：人體血液中的細(xì)菌內(nèi)毒素3.檢測(cè)的樣品：人體的血

9、清或血漿。其中血清為主要對(duì)象。,脂,4.臨床檢測(cè)內(nèi)毒素的意義,全國(guó)每年臨床感染患者2億人次（表現(xiàn)為：革蘭氏陰性菌、真菌、陽(yáng)性菌、病毒等感染），其中以革蘭氏陰性菌感染占了很大比例。 以往診斷這類(lèi)疾病主要采用方法為細(xì)菌培養(yǎng)法，但細(xì)菌培養(yǎng)法所需時(shí)間長(zhǎng)（24h以上）且病人服用抗生素有一定程度抑制作用，結(jié)果常常呈陰性（細(xì)菌內(nèi)毒素血癥患者血液檢測(cè)不到細(xì)菌），使臨床無(wú)法確切診斷。,我司應(yīng)用細(xì)菌內(nèi)毒素特異性試劑盒可以簡(jiǎn)便、快速測(cè)定血液中的細(xì)菌

10、內(nèi)毒素含量是否超過(guò)臨床限值，其檢測(cè)結(jié)果可以為臨床診斷提供重要依據(jù)。,5.醫(yī)院臨床檢測(cè)適用科室及范圍,適用范圍： 1）各種系統(tǒng)感染疾病 2）細(xì)菌性感染疾病 3）原因不明的發(fā)熱適用科室： ICU病房 急診科 感染科 兒科燒傷科、呼吸內(nèi)科、血液內(nèi)科、腎內(nèi)科、內(nèi)分泌科、腫瘤科、普外科、胸外科、移植科、婦產(chǎn)科,6.臨床血清內(nèi)毒素限值：≤0.03Eu/mL

11、,7.血清保存條件：在2~8℃中，可保存72h。,二、真菌（1-3）-β-D-葡聚糖檢測(cè)試劑盒臨床運(yùn)用,1.（1-3）-β-D葡聚糖概念： a.存在真菌的細(xì)胞壁中，是真菌特有的結(jié)構(gòu)之一 b.真菌類(lèi)中致病菌主要為：念珠菌、曲霉菌（毛霉菌、隱球菌、接合菌）等真菌；2.檢測(cè)的樣品：人體的血清、血漿，其中血清主要對(duì)象3.檢測(cè)的目標(biāo)：人體血液中的（1-3）-β-D葡聚糖,4.臨床檢測(cè)真菌的意義,a.目前真菌感染的普遍性

12、 近年來(lái)，由于造血干細(xì)胞移植、器官移植的廣泛開(kāi)展，高強(qiáng)度免疫抑制劑，大劑量化療藥物及廣譜抗生素的長(zhǎng)期應(yīng)用，使臨床患者體內(nèi)菌群失調(diào)，產(chǎn)生深部真菌感染的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。引起不明發(fā)熱或長(zhǎng)期低燒不退，常常被誤診為臨床耐藥性。b.目前真菌感染診斷的方法 1）細(xì)胞培養(yǎng)法（7至10天），臨床意義不大 2）活體取菌（患者痛苦難接受、漏檢率高）本司真菌快速診斷試劑盒： 1）快速檢測(cè)（1小時(shí)） 2）可微量檢測(cè)

13、至10pg/ml（臨床限值為20pg/ml） 3）特異性強(qiáng)，只與（1-3）-β-D葡聚糖反應(yīng),5.醫(yī)院臨床檢測(cè)適用科室及范圍,適用范圍： 1）各種系統(tǒng)感染疾病 2）深部真菌性感染疾病 3）原因不明的發(fā)熱 4）長(zhǎng)期適用抗生素，但仍為低熱體征者適用科室： ICU病房 急診科 感染科 燒傷科 兒科呼吸內(nèi)科、血液內(nèi)科、腎內(nèi)科、內(nèi)分泌科、腫瘤科、普外科、胸外科、移植科、風(fēng)濕免疫

14、科、婦產(chǎn)科,6.臨床血清中真菌多糖限值： 1） ≤20pg/mL，基本判為無(wú)深部真菌感染（10~20pg/ml之間作為真菌感染觀察期）； 2） ≥20pg/mL，疑似真菌感染，建議結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行判斷及治療。,7.血清保存條件：在2~8℃中，可保存72h。,三、細(xì)菌內(nèi)毒素、真菌檢測(cè)試劑盒與C-反應(yīng)蛋白的檢測(cè)試劑盒及降鈣素試劑盒的比較,試劑盒的比較,真菌（1-3）β-D葡聚糖檢測(cè)試劑盒注冊(cè)證,細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)試劑盒注冊(cè)證,醫(yī)療

15、器械生產(chǎn)許可證,四、鱟試劑檢測(cè)方法分類(lèi)及第四代顯色基質(zhì)法的意義,鱟試劑檢測(cè)方法分類(lèi),1、凝膠法鱟試劑（半定量） 第一代2、動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑（定量） 第二代3、顯色基質(zhì)動(dòng)態(tài)濁度法鱟試劑（定量） 第三代4、顯色基質(zhì)終點(diǎn)顯色法鱟試劑（定量） 第四代,全國(guó)首創(chuàng),細(xì)菌內(nèi)毒素、真菌（1-3）β-D葡聚糖試劑盒（終點(diǎn)顯色法）的優(yōu)勢(shì)：,a.快速，反應(yīng)時(shí)間1h；b.穩(wěn)定性好:試劑反應(yīng)體

16、系加入偶氮化試劑終止反應(yīng)后檢測(cè)，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均好；c.抗干擾能力強(qiáng)：由于偶氮化反應(yīng)顯玫紅色，于波長(zhǎng) 545nm 測(cè)定，克服血清 中濁度和顏色干擾。d.靈敏度高：可檢測(cè)血清中細(xì)菌內(nèi)毒素達(dá) 0.005 Eu/ml 以上； 可檢測(cè)血清中真菌（1-3）β-D葡聚糖達(dá) 5 pg/ml以上；e.臨床符合率高，可達(dá)98%；f.堿試劑法處理血清對(duì)脂血，溶血，黃疸樣本，渾濁樣本具有一定的屏蔽作用

17、。,細(xì)菌內(nèi)毒素（lps） 真菌（1-3）β-D葡聚糖 C因子 C因子 G因子 G因子 B因子 B因子 凝固酶原 凝固酶 凝固酶原 boc-leu-gly-arg——pNA（對(duì)硝基苯胺）

18、 pNA A=405nm測(cè)定（淡黃色） boc-leu-gly-arg- （游離） A=545nm測(cè)定（玫紅色）,,,,