高效液相色譜儀(hplc)校正方法

1、高效液相色譜儀（高效液相色譜儀（HPLC）校正方法）校正方法0.10.1輸液系統(tǒng)：輸液系統(tǒng)：0.1.10.1.1梯度誤差梯度誤差GC不超過不超過3%3%0.1.20.1.2泵流量設(shè)定值誤差泵流量設(shè)定值誤差Ss＜2%2%0.1.30.1.3流量穩(wěn)定性誤差流量穩(wěn)定性誤差SR＜2%2%0.20.2紫外檢測(cè)器性能紫外檢測(cè)器性能0.2.10.2.1基線噪聲不超過基線噪聲不超過51051044AUAU，基線漂移不超過，基線漂移不超過51051033

2、AUAU0.2.20.2.2定量測(cè)量重復(fù)性誤差（定量測(cè)量重復(fù)性誤差（6次進(jìn)樣）次進(jìn)樣）RSD≤1.5%RSD≤1.5%0.2.30.2.3最小檢測(cè)濃度不超過最小檢測(cè)濃度不超過11011077gmlgml萘甲醇溶液甲醇溶液0.2.40.2.4可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值不超過可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值不超過2nm(HP11002nm(HP1100高效液相色譜儀可由儀器自身完成高效液相色譜儀可由儀器自身完成)1校正條件校正條件1.

3、11.1環(huán)境溫度環(huán)境溫度1030℃1030℃，相對(duì)濕度低于，相對(duì)濕度低于65%65%1.21.2校正設(shè)備校正設(shè)備1.2.11.2.1秒表秒表分度值小于分度值小于0.10.1s1.2.21.2.2分析天平分析天平最大稱量最大稱量200g200g最小分度值最小分度值0.1mg0.1mg1.2.31.2.3容量瓶容量瓶1.2.41.2.4微量注射器微量注射器1.31.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和試劑1.3.11.3.1HPLCHPLC用甲醇、純

4、水，分析純的丙酮用甲醇、純水，分析純的丙酮1.3.21.3.211011044gmlgml，11011077gmlgml的萘甲醇溶液的萘甲醇溶液1.3.31.3.3紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液2校正方法校正方法2.12.1梯度誤差梯度誤差GC的校正的校正2.1.12.1.1進(jìn)行梯度洗脫程序，進(jìn)行梯度洗脫程序，A溶劑為水，溶劑為水，B溶劑為溶劑為0.1%0.1%丙酮的水溶液，丙酮的水溶液，B經(jīng)5個(gè)階段從個(gè)階段從0變到變到100%100

5、%，20%20%—40%40%—60%60%—80%80%—100%100%，重復(fù)測(cè)量?jī)纱?，取平均值，求各段梯度誤差，重復(fù)測(cè)量?jī)纱?，取平均值，求各段梯度誤差GciGci，取最大作為儀器，取最大作為儀器梯度誤差，公式：梯度誤差，公式：Gci=Gci=（LiLi—LmLm）Lm100%Lm100%LiLi：第：第i段信號(hào)值的平均值；段信號(hào)值的平均值；LmLm：各段輸出信號(hào)平均值的平均值：各段輸出信號(hào)平均值的平均值可接受標(biāo)準(zhǔn)：可接受標(biāo)準(zhǔn)：3%

6、≤Gci≤3%3%≤Gci≤3%2.22.2泵流量設(shè)定值誤差泵流量設(shè)定值誤差SsSs、流量穩(wěn)定性誤差、流量穩(wěn)定性誤差SR的校正的校正2.2.12.2.1將儀器的輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器聯(lián)接好，以甲醇為流動(dòng)相，按表一設(shè)定流量，待將儀器的輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測(cè)器聯(lián)接好，以甲醇為流動(dòng)相，按表一設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動(dòng)相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動(dòng)相，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確的收集流速穩(wěn)定后，在流動(dòng)相排出口用事先清洗

7、稱重過的容量瓶收集流動(dòng)相，同時(shí)用秒表計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確的收集RSDRSD=[∑[∑（XiXiX）2]]（n1n1）(1(1X)100%)100%I=1I=1RSDRSD：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）；）；n：測(cè)量次數(shù)；：測(cè)量次數(shù)；XiXi：第：第I次測(cè)量的峰面積次測(cè)量的峰面積X–n次進(jìn)樣的峰面積算術(shù)平均值次進(jìn)樣的峰面積算術(shù)平均值可接受標(biāo)準(zhǔn)：可接受標(biāo)準(zhǔn)：RSD≤1.5%RSD≤1.5%2.62.6波長(zhǎng)示值誤差波長(zhǎng)示值誤差2.6.12.6.1

8、用注射器將紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)為用注射器將紫外波長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)溶液（標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)為235nm235nm，257nm257nm，313nm313nm和350nm350nm）從檢測(cè)器入）從檢測(cè)器入口注入樣品池沖洗，并將池充滿，將波長(zhǎng)調(diào)到低于標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)口注入樣品池沖洗，并將池充滿，將波長(zhǎng)調(diào)到低于標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)5nm5nm處，到標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)處，到標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)4nm4nm處，測(cè)得的最大吸處，測(cè)得的最大吸收值處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)與標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)之差為波長(zhǎng)示值誤差；目前儀器可以在收值處

9、對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)與標(biāo)準(zhǔn)波長(zhǎng)之差為波長(zhǎng)示值誤差；目前儀器可以在1mlmin1mlmin的流量下，直接用空管連的流量下，直接用空管連接檢測(cè)器，每隔接檢測(cè)器，每隔2min2min改變改變1nm1nm，連續(xù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣，連續(xù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)樣10ul10ul，同樣可得波長(zhǎng)示值誤差。，同樣可得波長(zhǎng)示值誤差。2.6.22.6.2可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值誤差可調(diào)波長(zhǎng)紫外可見光檢測(cè)器波長(zhǎng)示值誤差(此項(xiàng)只適用于此項(xiàng)只適用于HP1100HP1100高效液相色譜儀且?guī)в?/p>

10、高效液相色譜儀且?guī)в蠬PHP工作站作站)。2.6.32.6.3打開打開HP1100HP1100液相色譜儀和液相色譜儀和HPHP工作站，打開輸液泵和檢測(cè)器，用純水沖洗系統(tǒng)直至穩(wěn)定，進(jìn)入工作站，打開輸液泵和檢測(cè)器，用純水沖洗系統(tǒng)直至穩(wěn)定，進(jìn)入DiagnosisDiagnosis窗口，點(diǎn)擊氘燈圖標(biāo)，進(jìn)入窗口，點(diǎn)擊氘燈圖標(biāo)，進(jìn)入showshowmodulemoduleteststests狀態(tài)，點(diǎn)擊狀態(tài)，點(diǎn)擊VWDVWDVLVLcalibrati

11、oncalibrationtesttest點(diǎn)擊點(diǎn)擊startstart，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入校正狀態(tài)，待校正完畢，將校正結(jié)果打印歸檔。，系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)入校正狀態(tài)，待校正完畢，將校正結(jié)果打印歸檔。2.6.42.6.4可接受標(biāo)準(zhǔn)：可接受標(biāo)準(zhǔn)：λ≤2nmλ≤2nm3性能確認(rèn)性能確認(rèn)3.13.1使用標(biāo)準(zhǔn)品或供試品，確認(rèn)儀器性能符合使用要求；使用標(biāo)準(zhǔn)品或供試品，確認(rèn)儀器性能符合使用要求；3.23.2先進(jìn)行色譜柱的性能確認(rèn)，內(nèi)容包括：分離度，對(duì)稱因子，理論塔板

12、數(shù)和峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。先進(jìn)行色譜柱的性能確認(rèn)，內(nèi)容包括：分離度，對(duì)稱因子，理論塔板數(shù)和峰面積標(biāo)準(zhǔn)偏差。3.33.3液相色譜柱的確認(rèn)液相色譜柱的確認(rèn)3.3.13.3.1測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣配制：稱量測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)樣配制：稱量1000mg1000mg苯酚，苯酚，100mg100mg聯(lián)苯加入到聯(lián)苯加入到100ml100ml容量瓶中，移入鄰苯二甲酸二容量瓶中，移入鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯各甲酯、鄰苯二甲酸二乙酯各1ml1ml，然后用甲醇定容到，然后用甲

13、醇定容到100ml100ml，混勻，從中移取，混勻，從中移取1ml1ml該溶液，用乙腈：水該溶液，用乙腈：水=70=70：3030定容至定容至100ml100ml。3.3.23.3.2方法：流動(dòng)相為乙腈：水方法：流動(dòng)相為乙腈：水=70=70：3030，流速為，流速為1.0mlmin1.0mlmin波長(zhǎng)為波長(zhǎng)為254nm254nm溫度為溫度為30℃30℃，進(jìn)樣量為：，進(jìn)樣量為：10ul10ul運(yùn)行運(yùn)行10min10min。3.3.33.3

14、.3色譜柱：色譜柱：ExtendC18ExtendC18AnalyticalAnalytical5um4.6250mm5um4.6250mm。3.3.43.3.4連續(xù)進(jìn)行連續(xù)進(jìn)行5次分析，分離度均次分析，分離度均R＞1.51.5；鄰苯二甲酸二乙酯對(duì)稱因子；鄰苯二甲酸二乙酯對(duì)稱因子S在0.800.80～1.501.50范圍范圍內(nèi)；鄰苯二甲酸二乙酯柱效＞內(nèi)；鄰苯二甲酸二乙酯柱效＞3000m3000m11；鄰苯二甲酸二乙酯峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)；

15、鄰苯二甲酸二乙酯峰面積的標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)≤1.5%≤1.5%。3.43.4按照性能確認(rèn)方法逐步進(jìn)行，并記錄譜圖；按照性能確認(rèn)方法逐步進(jìn)行，并記錄譜圖；根據(jù)性能測(cè)試的結(jié)果，評(píng)價(jià)儀器是否符合性能要求。根據(jù)性能測(cè)試的結(jié)果，評(píng)價(jià)儀器是否符合性能要求。4校正結(jié)果處理和校正周期校正結(jié)果處理和校正周期4.14.1校正結(jié)果全部項(xiàng)目均符合技術(shù)要求者，判為合格，方可使用。若某些指標(biāo)達(dá)不到要求，關(guān)于儀校正結(jié)果全部項(xiàng)目均符合技術(shù)要求者，判為合格，方可使用。若某些指標(biāo)