仔豬腸道健康及功能性飼料研究應(yīng)用

1、仔豬腸道健康及功能性飼料研究與應(yīng)用,,2009.07.03,,印遇龍,影響仔豬生長發(fā)育,,,?仔豬宮內(nèi)發(fā)育遲緩?仔豬斷奶應(yīng)激,,,生長緩慢、腹瀉　　　　　　　　　　　　　　　 免疫抑制　　　　　　　　　　　　　　　 腸道損傷　　　　　　　　　　　　　　　　　　 微生態(tài)平衡破壞　　　　　　　　　　　　　　　　　　 內(nèi)分泌紊亂,平均死亡率12%年死亡約240

2、0萬頭年經(jīng)濟損失120億元,,,,腸道發(fā)育與調(diào)控,消化系統(tǒng)發(fā)育阻滯,,仔豬早期斷奶已成為集約化、規(guī)模化養(yǎng)殖生產(chǎn)中所采取的一項重要手段，雖然早期斷奶技術(shù)可以提高母豬生產(chǎn)性能，也有利于提高仔豬的成活率，但伴隨而來的腹瀉、生長遲緩、消化不良、免疫力低下等仔豬“早期斷奶綜合癥”嚴重影響了養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟效益。,腸道最基本的功能是消化吸收，也是體內(nèi)最大的免疫器官，各種營養(yǎng)物質(zhì)主要在此吸收轉(zhuǎn)運，處于溝通機體內(nèi)外環(huán)境的重要位置。腸道的發(fā)育越來越成為限

3、制仔豬后期健康生長的重要因素，認識仔豬消化道的發(fā)育過程對做好仔豬早期斷奶及斷奶仔豬的生產(chǎn)管理非常重要。因此，仔豬腸道健康及其調(diào)控對規(guī)?；B(yǎng)豬具有現(xiàn)實意義。,背景,高銅濫用導(dǎo)致的危害,?引起動物中毒表現(xiàn)為血紅蛋白降低、黃疸、神經(jīng)癥狀、異食、生長發(fā)育遲緩超過500mg/kg可引起死亡?引起動物某些營養(yǎng)素缺乏降低鐵和鋅的吸收，引起鐵和鋅的缺乏癥；加速飼料中維生素的氧化破壞；加速飼料中油脂的氧化，出現(xiàn)哈味。,高銅濫用導(dǎo)致的危害,?影

4、響動物性食品的安全長期飼喂，肝腎銅殘留顯著提高銅中毒時，肝中銅含量高達750-6000mg/kg。?環(huán)境污染以萬頭豬場計，一年隨豬糞排出銅量為540kg。土壤中銅污染可以破壞土壤的物理、化學(xué)和生物學(xué)功能，引起土壤的肥力下降，影響作物產(chǎn)量和養(yǎng)分含量。,添加高鋅導(dǎo)致的問題,?高鋅的作用：促進仔豬生長和降低仔豬斷奶后腹瀉的效果。?一般使用劑量：2000-3000mg/kg?一般使用不超過2周，最長不超過四周?長時間使用會造成中

5、毒：發(fā)育停止、關(guān)節(jié)炎、腋下出血和胃腸炎。?同樣，環(huán)境問題,難以承受的繁榮,2100年--115億人口，1988年資源量鋁：224年--------18年銅：41年--------- 4年鋅：21年---------- 3年油：41年---------- 7年磷：100年---------- 17年 消耗殆盡引自Paul Harrison:The Third Revolution,有機砷制劑導(dǎo)致的環(huán)境砷污染,?

6、允許作為飼料藥物添加劑的砷制劑有：對氨基苯砷酸（50-100mg/kg）、 硝基羥基苯砷酸（30-50mg/kg）?部分飼料生產(chǎn)廠家片面強調(diào)： 超劑量添加－－皮膚紅?環(huán)境污染以萬頭豬場計：僅在商品豬日糧中添加阿散酸，每年要用360kg，向環(huán)境排放約124.4kg的砷。,?對農(nóng)作物的影響 土壤中砷酸鈉為40mg/kg，水稻減產(chǎn)50%；土壤中砷酸鈉為160mg/kg時，水稻不能生長；當灌溉水中砷濃度為20mg/kg，

7、水稻顆粒無收。,有機砷制劑導(dǎo)致的環(huán)境砷污染,Geogenic arsenic contamination and human health-Xinjiang, China,Geogenic arsenic contamination and human health,劣質(zhì)飼料添加劑導(dǎo)致的鎘污染,鎘（Cd）是一種有毒的重金屬元素，屬嚴重污染性元素。FAO和WHO 將Cd列為僅次于黃曲霉素和砷的食品污染物。?特點：在動物和人體內(nèi)排泄很慢，

8、有明顯的蓄積性。?危害：慢性毒性作用，主要是損害腎小管，并導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥。導(dǎo)致嚴重貧血、損害生殖系統(tǒng)，并干擾鋅、銅、鐵在體內(nèi)的吸收與代謝。,技術(shù)路線,主要進展-1,Chen et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 238-243,IUGR(左)CK,建立了仔豬腸道基因表達基因芯片變化圖譜,建立了早期斷奶應(yīng)激腸道黏膜蛋白質(zhì)組圖譜,Wang et al.,2009. Pro Fun Amino

9、Acids Carb : 383-395,,,建立了哺乳仔豬發(fā)育血液產(chǎn)物變化代謝組圖譜,Li et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 1-11,主要進展-2,哺乳仔豬發(fā)育(1-28d) 腸道組織形態(tài)學(xué)指標(y)與日齡(x)之間曲線方程 (n=30),首次闡明了仔豬哺乳期腸道黏膜發(fā)育變化規(guī)律,哺乳仔豬發(fā)育腸道絨毛長度、隱窩深度、上皮間淋巴細胞數(shù)和杯狀細胞數(shù)不受性別變化的影響。,絨毛長度、隱窩深度、上

10、皮間淋巴細胞數(shù)和杯狀細胞數(shù)不受空腸部位(空腸前段和空腸后段)的影響，但與回腸之間有差異。,腸道堿性磷酸酶是腸黏膜上的標志酶，可反映腸道的發(fā)育情況及腸上皮細胞的吸收能力，其不受性別變化的影響，免疫組化灰度不受腸道部位的影響，但mRNA相對表達量在空腸前段較空腸后段和回腸末端要高。,揭示了哺乳仔豬腸道功能性基因發(fā)育變化規(guī)律,1-28d 腸道堿性磷酸酶免疫組化灰度或腸道堿性磷酸酶mRAN相對表達量(y)與日齡(x)之間曲線方程,腸道堿性磷酸酶

11、免疫組化灰度僅在空腸前段表現(xiàn)出線性變化趨勢，其mRNA相對表達量發(fā)育趨勢分別表現(xiàn)為四次方曲線變化(空腸前段)、線性變化(空腸前段)和二次方曲線變化(回腸末端)。,率先克隆了豬腸道氨基酸轉(zhuǎn)運載體ASCT2、B0、b0,+AT和y+LAT1，以及小肽轉(zhuǎn)運載體PepT1的cDNA編碼區(qū)，并在Genbank上注冊了6個基因序列。,腸道氨基酸(中性ASCT1、堿性CAT1、酸性EAAC1) 和小肽PepT1轉(zhuǎn)運載體mRNA相對表達量均不受性別變化

12、的影響；酸性氨基酸EACC1和小肽PepT1不受腸道部位的影響，中性氨基酸ASCT1在空腸前段與空腸后段之間，空腸后段與回腸末端之間，差異顯著，而空腸前段和回腸末端之間則差異不顯著；堿性氨基酸CAT1在腸道不同部位之間存在差異。,1-28d 腸道氨基酸ASCT1、CAT1、EAAC1或小肽PepT1轉(zhuǎn)運載體基因mRAN相對表達量(y)與日齡(x)之間曲線方程,在空腸前段，ASCT1、CAT1和PepT1轉(zhuǎn)運載體mRNA相對表達量均表現(xiàn)為

13、四次方曲線變化，在空腸后段ASCT1 為二次方曲線變化，在回腸末端，ASCT1、CAT1、EAAC1和PepT1分別表現(xiàn)為線性、四次方曲線、三次方曲線和二次方曲線變化趨勢。,熱應(yīng)激蛋白(HSP)70主要在腸道黏膜表層表達，對維持腸道粘膜結(jié)構(gòu)和功能的完整性起著重要作用。斷奶應(yīng)激使腸道HSP70含量迅速增加。,日糧添加精氨酸(Arg)或精氨酸衍生物(NCG)使斷奶仔豬空腸黏膜HSP70表達升高，其中：A為Western blot分析，B為免

14、疫組化分析,應(yīng)激造成腸道結(jié)構(gòu)與功能變化的分子機制,Wu et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 396-408,日糧添加精氨酸(Arg)或精氨酸衍生物(NCG)使斷奶仔豬回腸黏膜HSP70表達升高,精氨酸(Arg)及其衍生物(NCG)是通過Arg-NO-HSP70的途徑維持腸道黏膜形態(tài)的完整性。,Wu et al.,2009. Pro Fun Amino Acids Carb : 396-408,

15、利用大腸桿菌脂多糖(LPS)建立了仔豬斷奶應(yīng)激引起腸道損傷的模型。斷奶應(yīng)激刺激仔豬腸道炎性介質(zhì)(如IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性細胞因子)的過量表達，引起腸黏膜上皮細胞增殖/凋亡的動態(tài)平衡紊亂，從而導(dǎo)致腸道結(jié)構(gòu)和功能嚴重受損。,LPS 組回腸集合淋巴結(jié)增殖陽性細胞稀疏(P > 0.05)，說明LPS 刺激抑制回腸集合淋巴結(jié)細胞的增殖(A)；與之相反，LPS 組回腸集合淋巴結(jié)凋亡陽性細胞顯著增多(P < 0.05)，說

16、明LPS 刺激促進了回腸集合淋巴結(jié)細胞凋亡(B)。,Han et al.,2008. Amino Acids, DOI 10.1007,細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常、氧化還原失衡、蛋白合成減少以及蛋白水解增加都是影響宮內(nèi)發(fā)育遲緩仔豬營養(yǎng)物質(zhì)吸收代謝紊亂以及小腸生長發(fā)育受阻的主要機制。,IUGR降低了調(diào)控免疫功能、氧化防御、中間代謝、蛋白合成和組織生長等組織特異蛋白的水平，增加了與蛋白水解、氧化應(yīng)激和ATP水解有關(guān)蛋白的水平。,IUGR影響新生仔豬小

17、腸功能的分子機制,有機微量元素,1.常用微量元素： Fe，Cu，Mn，Zn，Co，Cr，I，Se，2.常用絡(luò)合物配位體：氨基酸（Lys、Met、Gly、Thr、Ser、Glu、Asp、蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物）維生素（煙酸、VC、VB12）小肽、蛋白鹽,主要進展-3,有機微量元素在國內(nèi)的應(yīng)用,?在2004年以前，國內(nèi)市場以有機微量元素螯合物單體的推廣應(yīng)用為主（天科）?在2004年之后，國內(nèi)螯合物應(yīng)用由有機微量元素螯合物單體向有

18、機微量元素復(fù)合礦精發(fā)展 （天科）?近幾年，有機微量元素在國內(nèi)的普及程度得到了很大的飛躍，在乳豬料、母豬料和水產(chǎn)料中使用廣泛（天科）?功能性有機微量元素,鑒定方法,a. 客戶往往很關(guān)心你的產(chǎn)品是不是螯合物?（混合物）b. 用簡單的化學(xué)、鑒定和定性，(顏色反應(yīng)、顯微鏡鏡檢)結(jié)合定量鑒定分析來鑒別c. 理化分析方法（紅外光譜、示差測熱、X射線衍射） 目前,各廠家提出的螯合物的檢驗方法和鑒定方法很多,這近我們提出

19、分光光度法來檢測,但由于各方爭議的分歧也較大,還沒有形成一致的意見,這里不過多展開,微量元素氨基酸螯合物對維生素的影響,預(yù)混料中微量元素和膽堿對維生素A穩(wěn)定性的影響 表：在膽堿存在時微量元素對維生素A穩(wěn)定性的影響 微量元素 膽堿 30天損失率 45天損失率 月平均損失率 無機鹽 安全化處理 62.84±0.07

20、 79.80±0.03 53.20 無機鹽 市售 66.51±0.00 89.15±0.04 59.43 氨基酸螯合物 安全化處理 24.00±0.07 57.27±0.09 35.14 氨基酸螯合物 市售 22.22±

21、0.04 41.44±0.10 27.63,不同類型載體、微量元素和膽堿對維生素B1穩(wěn)定性的影響 微量元素 載體 膽堿 30天損失率 45天損失率 月平均損失率 無機鹽 沸石 安全化 48.15±0.01 73.82±0.07 49.21 氨基酸螯合物 沸石 安全化 7.09 ±0

22、.09 22.20±0.14 14.80 無機鹽 石粉 安全化 84.75±0.01 87.81±0.02 58.54 氨基酸螯合物 石粉 安全化 36.40±0.09 75.58±0.07 50.39 無機鹽 沸石 市售 21.00±

23、0.12 41.14±0.11 27.43 氨基酸螯合物 沸石 市售 -0.04±0.01 38.81±0.05 25.88 無機鹽 石粉 市售 81.28±0.05 91.26±0.02 60.84 氨基酸螯合物 石粉 市售 62.67±0

24、.14 78.36±0.08 52.24,微量元素氨基酸螯合物對維生素的影響,在膽堿存在時微量元素對維生素A穩(wěn)定性的影響,微量元素 膽 堿 30天損失率(%) 45天損失率 (%) 月平均損失率(%)無機鹽 安全化處理 62.84±0.07 79.80±0.03

25、 53.20 無機鹽 市 售 66.51±0.00 89.15±0.04 59.43 氨基酸螯合物 市售 24.00±0.07 57.27±0.09 35.14氨基

26、酸螯合物 安全化處理 22.22±0.04 41.44±0.10 7.63,當然，影響預(yù)混料或全價料中的微量組份活性的因素很多，諸如嚴格控制產(chǎn)品水分，選擇適當?shù)南♂寗┖洼d體，膽堿的防潮處理，維生素的包膜保護等等，也是很重要的。但是，微量元素有機螯合物在防止維生素失效、延長預(yù)混料貯存有效期則是確實的。預(yù)混料生產(chǎn)廠家的使用效果也充分肯定證實了此點,螯合物

27、對維生素的保護作用,導(dǎo)管插入部位示意圖,抽取頸動脈血樣,,硫酸鋅的鋅流量 0.94 mg/min蛋氨酸鋅的鋅流量 2.4mg/min硫酸銅的銅流量 1.02mg/min甘氨酸銅的銅 2.01 mg/min硫酸亞鐵 的鐵流量 1.22mg/min甘氨酸亞鐵的鐵流量 2.51 mg/min,高鋅有提高哺乳仔豬日增重的作用，并且蘇氨酸鋅的效果要好于硫酸鋅(p<0.05)。,氨基酸螯合鋅,高鋅顯著降低哺乳仔豬的料重比(p

28、<0.05) ，并且蘇氨酸鋅的效果要好于硫酸鋅。,氨基酸螯合鋅,加鋅組腹瀉率分別下降了42.84%、57.16%和64.29%、71.42%；與硫酸鋅組比較，蘇氨酸鋅組腹瀉率分別下降了25.06%、37.53%和50%。,蘇氨酸鋅組與陰性對照組相比，仔豬的血清IgG分別提高了25.79%、35.76%、42.87%，差異極顯著 (P<0.01)。,高劑量(250mg/kg)硫酸銅顯著提高仔豬日增重(p<0.05),氨基

29、酸螯合銅,不同鋅源對提高仔豬日增重的影響,不同鋅源對提高仔豬采食量的影響,不同銅源及添加量對仔豬料重比無顯著差異，但隨著添加量的提高，料重比有下降趨勢。而高劑量甘氨酸銅(250mg/kg)則會增加料重比,在另一斷奶仔豬的試驗中，觀測到日糧中含5mg/kg的賴氨酸螯合銅與常用的250mg/kg硫酸銅對仔豬的營養(yǎng)和生長效果無顯著差異。多添加賴氨酸螯合銅到100mg/kg并不能改善仔豬的生產(chǎn)性能,氨基酸螯合銅,生長豬營養(yǎng)和生長效果無顯著差異,

30、氨基酸螯合銅替代重金屬,對照組,氨基酸銅,氨基酸螯合銅調(diào)控肥豬氮代謝和肉品質(zhì),功能性有機微量元素,定義： 具有生理調(diào)控功能、強化營養(yǎng)素作用的穩(wěn)定型微營養(yǎng)素,成分組成和作用機理,1.成分組成： 由多種微量元素、維生素、氨基酸組成的絡(luò)合物，其結(jié)構(gòu)更接近動物生理條件下的存在形式，實現(xiàn)了營養(yǎng)素之間的有機結(jié)合；可以根據(jù)動物營養(yǎng)和生理需求調(diào)整組合方案2.作用機理：＊具有運轉(zhuǎn)作用，使營養(yǎng)素通過動物機體屏障到達靶器官，實現(xiàn)多層

31、面的生理調(diào)控作用＊提高動物機體微環(huán)境的營養(yǎng)素供給，加強營養(yǎng)素的橫向互補、協(xié)同效應(yīng)＊清除機體內(nèi)自由基，在細胞水平保護靶器官＊從多個層面實現(xiàn)生物活性物質(zhì)的激活和補充,＊促進動物生長，提高增重，提高飼料報酬＊提高動物幼齡期的生存能力、繁育期動物的繁育能力＊提高處于疫病流行時期、免疫過程、生理抗逆過程的 抗病、抗應(yīng)激能力＊改善動物產(chǎn)品的品質(zhì)和外觀＊改善水產(chǎn)動物的水生環(huán)境，清除有害物質(zhì)＊提高飼料品質(zhì)，提高采食量,基 本

32、 功 效,＊兩類劑型適用于各種類型的飼料產(chǎn)品、飲水劑、動物保健輔助劑及現(xiàn)場外用＊生長育肥豬、仔豬、種豬飼料＊蛋禽、肉禽、種禽飼料和飲水劑＊各類水產(chǎn)動物飼料＊特種毛皮動物飼料、補充料＊反芻動物飼料＊水產(chǎn)養(yǎng)殖現(xiàn)場調(diào)整劑＊動物保健品增效劑,適 用 范 圍,“功能性有機微量元素”本身屬于營養(yǎng)物質(zhì)在與營養(yǎng)性有機微量元素結(jié)合使用發(fā)揮出良好的作用，取得了理想的效果。我們可以把“功能性有機微量元素”比喻成一個“支點”在以動物營養(yǎng)

33、學(xué)為“杠桿”的作用力下去提高養(yǎng)殖的效益。 近代動物營養(yǎng)學(xué)的研究方向逐漸轉(zhuǎn)移至以研究營養(yǎng)素之間的互做、營養(yǎng)素與生物活性物質(zhì)之間互作、營養(yǎng)素與生命遺傳物資相關(guān)連的研究。 “功能性有機微量元素”本身也在模擬營養(yǎng)素之間的化學(xué)、生物化學(xué)互做、模擬酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)，有目地的在提供營養(yǎng)素的同時進行生理調(diào)控；這樣就可以達到高效、低成本的應(yīng)用效果。,,精氨酸(Arg)及其衍生物(NCG)對仔豬日采食量(A)、日增重(B)和腹瀉

34、率(C)的影響,Arg (b) NCG (c)改善絨毛長度及隱窩深度,主要進展-4,精氨酸及其代謝物具有緩解斷奶應(yīng)激,Tan, et al. Amino Acids. DOI 10.1007/s00726-008-0155-1,Arg on morphology in the small intestine of early-weaned pigs,Zhan et al.,2008. J. Nut,A,b,b,a,b,b,a,b,b,a

35、,B,b,a,ab,b,a,ab,b,a,ab,在日糧中添加1％的Arg，能防治發(fā)生在斷奶后7天內(nèi)的空腸萎縮癥，并降低斷奶后第2周的料重比15%。 （Tan et al. 2008. Amino Acid）,Arg和精氨酸生素能氧化供能，促進細胞增殖和粘膜發(fā)育；合成NO和多胺，增強腸道免疫屏障，對維護腸道正常形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能有重要作用。,,精氨酸促進血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達,,Yao et al., Pro Fun Amin

36、o Acids Carb 115－126,促進多胺α-酮戊二酸等腸粘膜滋養(yǎng)因子合成，促進下丘腦釋放生長激素，提高小腸血管生長因子基因表達水平,精氨酸可通過過氧化物酶體增殖物活化受體γ( PPARγ)信號途徑發(fā)揮緩解腸道損傷的作用，通過激活PPARγ mRNA的表達而緩解LPS刺激導(dǎo)致的腸道炎性細胞因子的過量產(chǎn)生，從而緩解腸道損傷。,LPS 刺激使斷奶仔豬脾臟、胸腺和外周血白細胞PPARγ蛋白表達升高(Western blot 分析),

37、PPARγ有可能成為緩解仔豬免疫應(yīng)激的一個新靶點，如通過PPARγ 配體或營養(yǎng)素來調(diào)控PPARγ 的表達或活性，從而緩解或克服免疫應(yīng)激對畜禽生長造成的負面影響，對養(yǎng)豬生產(chǎn)具有積極的意義。,Arg提高免疫細胞因子基因表達,Liu et al. 2008.Bri. J Nut. 100, 552–560,不同水平精胺對斷奶仔豬小腸黏膜形態(tài)的影響,灌服1200μmol/d 精胺, 明顯改善21 日齡斷奶仔豬小腸組織學(xué)形態(tài)與功能。精胺可明顯改善

38、斷奶后仔豬腸道吸收功能, 其作用效果具有一定后續(xù)性。精胺能促進仔豬腸道的發(fā)育和成熟，對改善其生產(chǎn)性能有一定實際意義。,日糧中添加AKG 可在一定程度上改善仔豬的小腸組織學(xué)形態(tài)，提高小腸的主動吸收功能，緩解斷奶等應(yīng)激造成的腸道黏膜受損。,Mucosal protein and DNA Escherichia coli (LPS) challenge Liu et al. 2008.Bri. J Nut. 100, 552–560,代

39、乳料中添加不同濃度精氨酸對7日齡斷奶仔豬平均日增重的影響,注：同行數(shù)據(jù)標不同字母表示差異顯著（P<0.05）。,與對照組比較，在代乳料中添加0.6~0.8%的精氨酸飼喂14d，平均日增重提高42％上述數(shù)據(jù)均表明，精氨酸缺乏是限制新生仔豬發(fā)揮最大生長潛力的一個主要因素,Yao et al., J. Nutr. 138: 867–872,環(huán)磷酰胺刺激下精氨酸改善了仔豬生長性能,Liu et al. 2008.Bri. J Nut.

40、100, 552–56,,NCG,Control,精氨酸衍生物(NCG)產(chǎn)品的獨特優(yōu)勢,主要進展-5,精氨酸(%)濃度變化(1 、2、4周),藥用植物超微粉顯著提高血清NCG （10%-22%)，刺五加提取物提高精氨酸濃度提高20-31%，消化率提高15%-31%,Yin et al. Amino Acids DOI 10.1007/s0026-008-0142-6,藥用植物提取物通過提高仔豬內(nèi)源性NCG生成,,藥用植物對不同日齡仔豬回

41、腸末端氨基酸消化的影響,Kong et al.,Amino Acids. DOI 10.1007/s00726-008-0176-9,植物提取物可以提高仔豬體內(nèi)內(nèi)源性精氨酸的合成,植物提取物可以提高仔豬體內(nèi)內(nèi)源性谷氨酸的濃度,植物提取物可以提高仔豬血漿中的異亮氨酸的濃度,植物提取物可以提高仔豬血漿中的亮氨酸的濃度,植物提取物可以提高仔豬血漿中的總氨基酸的濃度,植物提取物可以提高仔豬ADG,植物提取物可以顯著降低料重比,,添加后第7 天仔

42、豬空腸（J）、回腸（I）和盲腸（C）內(nèi)容物細菌16S rDNA的V6-V8片斷的DGGE 圖譜（a）、電泳條帶示意圖（b）和相似性分析（c）注：ST、J、I和C分別代表標樣、空場、回腸和盲腸；1、2、3分別代表藥用植物復(fù)方組，粘桿菌素組和基礎(chǔ)日糧組,植物復(fù)方增加腸道微生物多樣性 . Fang et al. 2009 Livestock Science. 123: 268–275,專利 200710053584.9,在發(fā)光桿菌中建立

43、Red/ET同源重組系統(tǒng)，并運用此系統(tǒng)敲除了晶體蛋白CipB和CipA,主要進展--6,pBAD-cipB-LF,專利 200610166536.6,牛乳鐵蛋白肽在發(fā)光桿菌中高效表達,牛乳鐵蛋白素在畢赤酵母中的表達研究,牛乳鐵蛋白素在21日齡斷奶仔豬腹瀉影響,Lfcin對21日齡斷奶仔豬腸道微生物的影響,Zhiru Tang,et al.. Brtish J.Nutr. 2009,101: 998-1005.,改善腸道微生物區(qū)系,Fu