斑地錦正丁醇萃取物對小鼠肝損傷的保護作用及其化學(xué)成分研究.pdf

1、目的：研究斑地錦正丁醇萃取物對小鼠肝損傷的保護作用及其化學(xué)成分，為斑地錦的臨床應(yīng)用提供理論和實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、斑地錦正丁醇萃取物對小鼠肝損傷的保護作用研究
　　60只雄性昆明小鼠，隨機分為正常組，模型組，斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組和聯(lián)苯雙酯組，共6組，每組10只?？瞻捉M和模型組給予等容積的蒸餾水，其他組灌胃給予相應(yīng)劑量的藥物15d，每天上午灌胃1次，在末次灌胃藥物后1h，除正常組外，其余組以60％

2、乙醇12mL/kg誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，禁食不禁水，24h后，摘眼球取血，分離血清，并快速取出肝臟。測定血清中AST、ALT、TC和TG水平，肝勻漿中MDA、SOD和GSH水平。部分肝臟切片后，HE染色觀察病理組織形態(tài)，部分以RT-qPCR分析肝組織中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表達。
　　2、斑地錦正丁醇萃取物的化學(xué)成分研究
　　利用MTT法考察斑地錦正丁醇萃取物的大孔樹脂洗脫部位對撲熱息痛誘導(dǎo)的HepG2

3、細胞損傷的保護作用。通過計算細胞存活率，確定對撲熱息痛誘導(dǎo)的HepG2細胞損傷具有保護作用的活性部位。然后對其活性部位以反相硅膠柱、MPLC制備及反復(fù)的Sephadex LH-20柱進行分離純化。
　　3、斑地錦正丁醇萃取物中單體鞣花酸對小鼠肝損傷的保護作用研究
　　50只雄性昆明小鼠，隨機分為5組，分別為正常組，模型組，鞣花酸低、高劑量組和聯(lián)苯雙酯組，每組10只?？瞻捉M和模型組給予等容積的蒸餾水，其他組灌胃給予相應(yīng)劑量的藥

4、物15d，每天上午灌胃1次，在末次灌胃藥物后1h，除正常組外，其余各組以60%乙醇12ml/kg誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，禁食不禁水，24h后，摘眼球取血，分離血清，并快速取出肝臟。測定血清中AST、ALT、TC和TG水平，肝勻漿中MDA、SOD和GSH水平。部分肝臟切片后，HE染色觀察病理組織形態(tài)，部分以RT-qPCR分析肝組織中TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表達。
　　結(jié)果：
　　1、與正常組相比，酒精性肝損傷

5、模型組血清中AST、ALT、TG、TC水平明顯升高，肝勻漿中MDA含量明顯增加，SOD和GSH水平則降低，TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表達量明顯增加；病理組織學(xué)觀察到肝細胞排列紊亂，發(fā)生嚴重的變性，壞死，細胞質(zhì)疏松，細胞核深染等情況。與模型組相比，斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組均可以明顯降低ALT、TG水平（P<0.05，P<0.01，P<0.01），升高SOD水平（P<0.05，P<0.01）；斑地錦正丁醇萃取物

6、中、高劑量組可以顯著降低AST、TC、MDA水平（P<0.01， P<0.01），升高GSH水平（P<0.01，P<0.01）；斑地錦正丁醇萃取物低、中、高劑量組均可以顯著降低肝組織中NF-κB、TNF-α基因的mRNA表達（P<0.01，P<0.01，P<0.01）；中、高劑量組還能顯著降低TLR4基因的mRNA表達（P<0.01，P<0.01）。病理組織學(xué)顯示斑地錦正丁醇萃取物各劑量組均不同程度的減輕了肝組織的病理損傷程度。

7、　　2、斑地錦正丁醇-50%乙醇部位、70%乙醇部位和95%乙醇部位在1～10μg/mL范圍內(nèi)對撲熱息痛引起的HepG2細胞的損傷均具有保護作用；對以上三個保肝活性部位進行分離，從斑地錦正丁醇萃取物的50%乙醇部位得到了3個單體化合物，從70%乙醇部位和95%乙醇部位均得到了1個單體化合物。經(jīng)LC-MS和NMR分析，確定其為槲皮素、山奈酚和鞣花酸。
　　3、與模型組相比，鞣花酸可以明顯降低AST、ALT、TC、TG、MDA水平，顯

8、著升高SOD、GSH水平（P<0.01）；能明顯降低TLR4、NF-κB、TNF-α基因的mRNA表達。病理組織學(xué)結(jié)果顯示，鞣花酸各劑量組均不同程度的減輕了肝組織的病理損傷程度。
　　結(jié)論：
　　1、斑地錦正丁醇萃取物對乙醇誘導(dǎo)的急性酒精性肝損傷具有保護作用，其作用機制與改善脂質(zhì)代謝、抗氧化及通過抑制TLR4—NF-κB信號通路的活化來減少細胞炎癥因子（如TNF-α）的產(chǎn)生等有關(guān)。
　　2、斑地錦正丁醇-50%乙醇部位