秀麗隱桿線蟲MEX-3串聯(lián)KH結構域、擬南芥APUM5 PUF結構域及精氨酸甲基轉移酶PRMT9的結構和功能研究.pdf

1、生物體由蛋白質(zhì)、DNA、RNA等生物大分子組成，這些生物大分子在生物體各種調(diào)控通路中相輔相成，共同維持生命體的正常運轉。它們主要通過DNA與RNA、蛋白質(zhì)與DNA、蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用進行生物信息的傳遞，最終完成生物體的一系列活動。
　　其中，秀麗隱桿線蟲MEX-3蛋白質(zhì)的KH結構域與擬南芥PUF類蛋白質(zhì)APUM5都是通過與mRNA的3'不翻譯區(qū)相互作用，進而激活或抑制mRNA的翻譯過程，調(diào)控整個生命進程。而斑馬

2、魚精氨酸甲基轉移酶PRMT9通過修飾某些蛋白質(zhì)精氨酸的甲基化，使甲基化的蛋白質(zhì)某種功能被激活或被抑制，進而影響生物體一系列下游調(diào)控過程。
　　MEX-3蛋白質(zhì)在秀麗隱桿線蟲的P granule中被發(fā)現(xiàn)，具有串聯(lián)的KH結構域，它通過結合RNA調(diào)控生殖細胞系全能干細胞的更新及早期胚胎發(fā)生時期細胞的分化。PUF類蛋白質(zhì)存在于多種生物體中，擬南芥APUM5通過其PUF結構域結合病毒基因組從而實現(xiàn)自我防御的功能。而精氨酸甲基轉移酶PRMT9

3、通過甲基化剪接因子參與選擇性剪接的相關調(diào)控。通過研究蛋白質(zhì)與RNA、蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)作用的結構基礎，能幫助我們進一步的了解生物體中各種調(diào)控過程的分子機制。
　　我們主要利用大腸桿菌體外表達了秀麗隱桿線蟲MEX-3 KH結構域、擬南芥APUM5 PUF結構域，昆蟲細胞體內(nèi)表達了精氨酸甲基轉移酶PRMT9。通過NTA親和層析柱、Hiload 16/60 Supdex 75/200、MonoS/Q等分離純化手段獲得純度較高、狀態(tài)良好的目的