人類nectin-2蛋白V結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)和功能研究.pdf

1、Nectin蛋白是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞黏附分子，它在不需要Ca2+的情況下參與細(xì)胞間的黏連。Nectin蛋白家族共有四個(gè)成員：nectin-1、nectin-2、nectin-3和nectin-4，它們具有相似的結(jié)構(gòu)特征：胞外段有三個(gè)連續(xù)的免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(immunologlobin-likedomain，Ig-likedomain)，分別是N端的一個(gè)Ig-Vdomian和C端的兩個(gè)Ig-C2domain。Nectin蛋白通過順式

2、二聚化(cis-dimerization)和反式二聚化作用(trans-dimerization)來調(diào)節(jié)細(xì)胞間的黏連。作為nectin家族中的一員，nectin-2(CD112)除了擁有上面的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和細(xì)胞黏附功能外，還有其它一些重要的生物學(xué)功能，如：作為某些病毒受體、介導(dǎo)病毒在細(xì)胞細(xì)胞間的傳遞和結(jié)合NK細(xì)胞和殺傷性T淋巴細(xì)胞(CTL)表面的活化性受體CD226從而激活NK細(xì)胞和CTL殺傷活性等等。 目前，有兩個(gè)nectin樣分

3、子(Necl-1和Necl-5)的部分結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)得到解析，但是至今還未見有nectin蛋白結(jié)構(gòu)報(bào)道。鑒于CD112在細(xì)胞黏附和腫瘤免疫方面具有重要功能，解析出CD112V結(jié)構(gòu)域的晶體結(jié)構(gòu)，將有助于深入理解其黏附機(jī)制，以及與病毒表位面蛋白及其受體CD226結(jié)合的精確位點(diǎn)，進(jìn)而為預(yù)防病毒感染和腫瘤治療提供結(jié)構(gòu)學(xué)方面的理論依據(jù)。 為此，本文在原核細(xì)胞里表達(dá)nectin-2V結(jié)構(gòu)域的包涵體(inclusionbodies)，經(jīng)體外

4、復(fù)性和純化后得到可溶性蛋白，將其濃縮至濃度為5mg/ml和10mg/ml，使用懸滴氣相擴(kuò)散法生長晶體，并對(duì)晶體生長的條件進(jìn)行優(yōu)化。經(jīng)X-射線衍射儀照射晶體后，收集到一套分辨率至1.85A的晶體衍射數(shù)據(jù)。隨后的數(shù)據(jù)分析和處理顯示晶體空間群為P21，晶胞參數(shù)為a=52.3A，b=43.9A，c=56.1A，andβ=118.2°，一個(gè)晶體學(xué)不對(duì)稱單位中含有二個(gè)nectin-2V結(jié)構(gòu)域分子。最終，我們解析得到了nectin-2Vdomain的