活血通絡、清熱利濕方對IgA腎病大鼠腎組織IL-13、IL-4及血清CIC的影響.pdf

1、目的：采用灌服牛血清白蛋白（BSA+CCL4皮下注射），以及聯(lián)合脂多糖LPS尾靜脈注射建立IgA腎病大鼠模型，并且給予活血通絡方進行干預治療，通過觀察實驗性大鼠IgA腎病模型的健康狀況、24小時尿蛋白定量、血生化指標、腎臟病理結構的改變、大鼠腎組織IL-13、IL-4的表達及血清CIC的濃度的改變，以探討活血通絡、清熱利濕方對IgA腎病的作用機制。
　　方法：將40只體重在180-200g的SD大鼠喂養(yǎng)于標準實驗室的環(huán)境中，適應性

2、飼養(yǎng)1周，然后隨機分配成4組，分別為正常組、模型組、貝那普利組以及中藥組。按照張靜、李靜等人[1]改良的IgA腎病大鼠模型方法進行造模，隔日灌服牛血清白蛋白BSA600mg/kg（BSA與蒸餾水按1:100配成溶液），持續(xù)12周；CCL4注射方式：CCL40.1ml+蓖麻油0.3ml進行皮下注射，每周一次，持續(xù)12周；聯(lián)合LPS（第13周、第14周LPS0.05mg尾靜脈注射）應用。造模成功后1周予以各組相對應的藥物灌胃，持續(xù)4周，于第

3、18周末取材，造模期間，正常組予以蒸餾水（4ml/kg）隔日灌胃，皮下注射生理鹽水0.6ml，每周1次，第13周、第14周末予以0.2ml生理鹽水尾靜脈注射，治療期間（15-18周），正常組與模型組予等量蒸餾水灌胃，每日1次。分別于實驗的第8、12、14、18周，將大鼠飼養(yǎng)于代謝籠中，禁食，不禁水，收集24小時尿液，以檢測其24小時尿蛋白定量。在第18周末時，禁食12小時以上，測量體重，按體重腹腔注射麻醉藥，并于股動脈采血，收集血清，以

4、檢測血清CIC，取腎組織采用實時熒光定量PCR法以檢測IL-13、IL-4的表達情況。
　　結果：
　　1.正常組精神正常，毛色光亮，反應靈敏，攝食及飲水均正常；模型組、貝那普利組以及中藥組大鼠造模前與正常組健康狀態(tài)相同，造模開始后，3組大鼠逐漸出現(xiàn)毛色光澤度逐漸變差、精神萎靡甚至脫毛、體重減輕、反應遲鈍等癥狀。予以貝那普利組以及中藥組相應藥物治療后，兩組大鼠的精神及身體一般狀況均較模型組有所改善。
　　2.與正常組相

5、比較，模型組、貝那普利組、中藥組三組大鼠24-UTP明顯升高，并且有統(tǒng)計學意義，予以貝那普利組、中藥組兩組相應藥物治療后，模型組大鼠與兩組相比，UTP明顯增多，而貝那普利組、中藥組大鼠24-UTP變化不大，無統(tǒng)計學意義。
　　3.正常組、模型組、貝那普利組以及中藥組四組大鼠肌酐、尿素氮相比，無統(tǒng)計學意義。正常組大鼠血脂無異常，模型組、貝那普利組以及中藥組與正常組相比，血脂明顯升高，有統(tǒng)計學意義，模型組、貝那普利組及中藥組大鼠血脂無

6、明顯變化，無統(tǒng)計學意義。
　　4.腎組織病理學觀察。光鏡：正常組腎小球大小形態(tài)正常，系膜及腎小管無明顯病理改善，模型組大鼠腎小球形態(tài)較正常，但系膜及基質明顯增厚，中藥組及貝那普利組腎小球系膜較正常組增厚，但與模型組相比，其病理改變程度較小。免疫熒光：正常組大鼠腎組織內未觀察到有免疫復合物沉積，模型組可明顯觀察到腎小球系膜區(qū)有綠色熒光免疫復合物沉積，貝那普利組、中藥組兩組均有不同程度的免疫復合物沉積，但均比模型組較輕。
　　5

7、.RT-PCR觀察IL-13mRNA、IL-4mRNA在腎組織中的表達。與正常組相比，模型組、中藥組及貝那普利組腎組織中IL-13mRNA、IL-4mRNA表達明顯升高；中藥組及貝那普利組與模型組相比， IL-13mRNA、IL-4mRNA表達顯著下降，有統(tǒng)計學意義；中藥組與貝那普利組兩組相比，IL-13mRNA、IL-4mRNA表達減少，并且具有統(tǒng)計學意義。
　　6.ELISA觀察CIC在IgA大鼠血清中的表達。與正常組相比，模

8、型組、中藥組及貝那普利組血清中CIC含量明顯升高，有統(tǒng)計學意義；貝那普利組及中藥組與模型組相比， CIC含量顯著下降，有統(tǒng)計學意義；中藥組與貝那普利組兩組相比，CIC含量變化不大，無統(tǒng)計學意義。
　　結論：
　　1.活血通絡、清熱利濕方可以改善大鼠的一般狀況，降低IgA腎病大鼠的24小時尿蛋白定量，改善IgA腎病大鼠的腎臟病理損傷情況。說明活血通絡方對IgA腎病具有一定的治療作用，并且對腎臟還具有一定的保護作用。