杏香兔耳風抗菌活性成分作用機制研究.pdf

1、本論文由四部分組成。第一章綜述了金黃色葡萄球菌病原特征、致病性、中藥抑菌成分、抑菌方法及機制。第二章研究了杏香兔耳風Ainsliaea bonatii Beauv.中對苯二酚和熊果苷對六種受試菌株的體外抗菌活性。第三章通過研究對苯二酚對受試菌的 、AKP含量、電導率、胞外蛋白含量、SDS-PAGE電泳分析、SEM等方面的變化，探明對苯二酚對SA、MRSA和β-Lactamase producingStaphylococcus aureu

2、s的抑菌作用機制。第四章采用HPLC法，建立了杏香兔耳風全草中熊果苷和對苯二酚的含量測定方法；建立了以離子液體為萃取劑，測定杏香兔耳風不同部位中熊果苷和對苯二酚2種化合物含量的方法。
　　第一章中藥抑菌成分及機制研究進展
　　本章對金黃色葡萄球菌病原特征、致病性，中草藥抑菌成分、體內外抑菌方法及體外抑菌機制的研究進展進行綜述。
　　第二章對苯二酚和熊果苷對受試菌的體外抗菌活性研究
　　采用紙片擴散法(K-B法)分

3、別測定杏香兔耳風中對苯二酚和熊果苷對受試菌的抑菌圈大小(IZ)和最低抑菌濃度(MIC)；液體培養(yǎng)法測定半數(shù)抑制濃度(IC50)；液體培養(yǎng)法和平面劃線法測定最低殺菌濃度(MBC)。結果顯示，對苯二酚和熊果苷對SA、MRSA和β-Lactamase producingS.aureus均有一定的抗菌活性，但對EC、ESBLs-EC和PA未顯示抗菌活性。其中，對苯二酚對SA、MRSA和β-Lactamase producingS.aureus的

4、MIC分別為0.31、1.25和0.63mg/mL，熊果苷對SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的MIC分別為2.5、10.0和10.0 mg/mL；對苯二酚對SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的IC50分別為1.09±0.05、1.74±0.06和1.17±0.01 mg/mL，熊果苷對SA、MRSA和β-Lactamase producingS.a

5、ureus的IC50分別為8.42±0.02、16.74±0.04和18.14±0.02 mg/mL。
　　第三章對苯二酚抑菌機制的研究
　　通過研究受試菌的AKP含量、電導率、胞外可溶性蛋白含量、菌體蛋白SDS-PAGE電泳和菌體形態(tài)SEM電鏡等方面的變化，探討對苯二酚對SA、MRSA和β-Lactamase producing S. aureus的抑菌機制。
　　研究表明：對苯二酚作用于細菌，導致細菌細胞壁和細胞膜

6、破壞，通透性增加，細胞內物質外漏；同時還影響了細菌蛋白質合成和相關基因表達，使相應的蛋白質合成減少。
　　第四章離子液體/HPLC法測定杏香兔耳風中熊果苷和對苯二酚的含量
　　本章采用HPLC法，使用Purospher star RP-C18柱（250mm×4.6mm,5μm），以甲醇-0.4％磷酸水為流動相，流速0.65 mL/min，低壓洗脫，檢測波長為286nm，柱溫室溫(26±2℃)。結果顯示熊果苷進樣量在0.35~

7、3.5μg范圍內呈線性關系（r=1.0000,n=6），平均回收率為99.75%；對苯二酚進樣量在0.025~0.25μg范圍內呈線性關系（r=1.0000, n=6），平均回收率為98.04%。
　　建立以離子液體1-丁基-3-甲基咪唑溴化物([BMIM]Br)、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽([BMIM]BF4)、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIM]PF6)和1-己基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([HMIM]PF6)作

8、為萃取劑，甲醇、乙腈和乙醇作為分散劑，超聲輔助萃取結合反相高效液相色譜法/紫外檢測器同時測定杏香兔耳風不同部位中熊果苷和對苯二酚2種化合物含量的方法。以甲醇-0.4%磷酸水為流動相，低壓洗脫，流速0.65 mL/min，檢測波長為286 nm。結果顯示，過50目篩的杏香兔耳風根部位粉末，以固液比1:60(g/mL)時0.7 mol/L的[BMIM]BF4甲醇溶液提取率最高。熊果苷進樣量在1.4~14.0μg范圍內呈線性關系（r=1.00