p-STAT3-SOCS1蛋白在原發(fā)性干燥綜合征患者唇腺組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、干燥綜合征（Sjogren’s syndrome，SS）是一種較為常見(jiàn)的自身免疫性疾病，主要侵犯外分泌腺，尤以淚腺和唾液腺受累為主。以口干、眼干為主要臨床表現(xiàn)，但亦可出現(xiàn)多系統(tǒng)功能損害，嚴(yán)重者可危及患者生命。但其發(fā)病機(jī)制尚不清楚。目前認(rèn)為T(mén)、B淋巴細(xì)胞的異常活化發(fā)揮著重要作用。已有研究顯示，用決定Tfh細(xì)胞功能的細(xì)胞因子IL-21刺激系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血淋巴細(xì)胞后，其p-STAT3和SOCS1的表達(dá)水平隨之發(fā)生變化。也有研究顯示，在

2、類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎大鼠的滑膜中p-STAT3的表達(dá)水平是升高的。說(shuō)明p-STAT3在自身免疫性疾病中發(fā)揮作用，且p-STAT3參與的CIS的表達(dá)對(duì)SOCS1的表達(dá)是極其重要的。p-STAT3和SOCS1二者在唇腺組織T淋巴細(xì)胞活化以及唇腺上皮細(xì)胞凋亡中的作用尚少有研究報(bào)道。
　　目的：
　　本研究通過(guò)收集臨床確診為原發(fā)性干燥綜合征患者唇腺組織，采用免疫熒光法和Western Blot方法分別檢測(cè)不同病理等級(jí)唇腺組織中的p-STAT

3、3、SOCS1的表達(dá)水平，比較Ⅰ、Ⅱ級(jí)和Ⅲ、Ⅳ級(jí)組中兩種蛋白的表達(dá)差異，再進(jìn)一步觀察病理改變?yōu)棰蠹?jí)組和Ⅳ級(jí)組之間這兩種蛋白表達(dá)的差異，并探討其與CD4+T細(xì)胞的關(guān)系，用以證實(shí)p-STAT3/SOCS1信號(hào)通路是否通過(guò)誘導(dǎo)T細(xì)胞的活化對(duì)干燥綜合征的發(fā)病及疾病發(fā)展產(chǎn)生影響，旨在為未來(lái)干燥綜合征的治療提供新的干預(yù)靶點(diǎn)。
　　方法：
　　1首先應(yīng)用單標(biāo)免疫熒光和Western blot法分別檢測(cè)Ⅲ、Ⅳ級(jí)組和Ⅰ、Ⅱ級(jí)組唇腺組織中p-S

4、TAT3、SOCS1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率和蛋白相對(duì)表達(dá)量。再應(yīng)用雙標(biāo)免疫熒光檢測(cè)Ⅲ、Ⅳ級(jí)組和Ⅰ、Ⅱ級(jí)組唇腺組織中CD4+T細(xì)胞的表達(dá)中p-STAT3、SOCS1的表達(dá)位置并計(jì)數(shù)陽(yáng)性患者個(gè)體數(shù)。
　　2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Ⅲ、Ⅳ級(jí)組與Ⅰ、Ⅱ級(jí)組中的陽(yáng)性個(gè)體數(shù)的比較采用Fisher確切概率法進(jìn)行檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Ⅲ級(jí)組、Ⅳ級(jí)組之間淋巴細(xì)胞灶中的陽(yáng)性細(xì)胞率的差異的比較采用秩和檢驗(yàn)，以P<0

5、.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1免疫熒光單標(biāo)檢測(cè)p-STAT3、SOCS1在唇腺組織中的表達(dá)
　　免疫熒光法單標(biāo)結(jié)果顯示，干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中可見(jiàn)較多的p-STAT3綠色熒光顆粒，而Ⅰ、Ⅱ級(jí)組僅有極少量的綠色熒光顆粒表達(dá)。同時(shí)，Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中也可見(jiàn)較多的SOCS1綠色熒光顆粒，而Ⅰ、Ⅱ級(jí)組僅有極少量的綠色熒光顆粒表達(dá)。另外，發(fā)現(xiàn)在唇腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞中也可見(jiàn)有p-STAT3、S

6、OCS1的綠色熒光表達(dá)。
　　2 Western blot檢測(cè)p-STAT3、SOCS1在唇腺組織中的表達(dá)
　　Western blot分析顯示，與Ⅰ、Ⅱ級(jí)組（0.083±0.063）相比，Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織中p-STAT3蛋白表達(dá)水平升高，且Ⅳ級(jí)唇腺組織中p-STAT3的表達(dá)量（2.777±0.117）高于Ⅲ級(jí)病變組織（1.089±0.001），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組之間的的表達(dá)有明顯差異（P＜0.05）。同時(shí)，SOCS1蛋白的

7、表達(dá)水平也高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)組（0.033±0.002），Ⅳ級(jí)病變組織（1.233±0.051）的表達(dá)量高于Ⅲ級(jí)病變組織（0.506±0.011），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組之間的的表達(dá)有明顯差異（P＜0.05）。
　　3免疫熒光單標(biāo)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞在唇腺組織中的表達(dá)
　　免疫熒光法單標(biāo)結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中可見(jiàn)大量CD4+紅色熒光顆粒，而在Ⅰ、Ⅱ級(jí)組唇腺組織中極少有該紅色熒光顆粒的表達(dá)。
　　4免疫熒

8、光雙標(biāo)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞中p-STAT3、SOCS1的表達(dá)
　　CD4/p-STAT3雙標(biāo)免疫熒光結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中CD4+T淋巴細(xì)胞中可見(jiàn)p-STAT3的表達(dá)，且Ⅳ級(jí)患者病變組織中的CD4+p-STAT3+T淋巴細(xì)胞的陽(yáng)性率高于Ⅲ級(jí)組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析兩組之間的的表達(dá)無(wú)明顯差異（Z=-0.645，P=0.519）。CD4/SOCS1雙標(biāo)免疫熒光結(jié)果顯示，在干燥綜合征Ⅲ、Ⅳ級(jí)組唇腺組織淋巴細(xì)胞灶中CD