硫化氫減輕腦缺血后tPA導(dǎo)致的腦出血.pdf

1、目的：組織纖溶酶原激活酶（tissue plasminogen activator，tPA）是目前唯一經(jīng)過(guò)美國(guó)食品和藥物管理局（FDA）批準(zhǔn)用于急性腦卒中的溶栓藥物，然而由于tPA的時(shí)間窗狹窄以及增加了腦出血的風(fēng)險(xiǎn)等原因，應(yīng)用患者比例非常小。硫化氫（hydrogen sulfide，H2S）是繼一氧化氮（NO）和一氧化碳（CO）后人們發(fā)現(xiàn)的第三個(gè)重要的內(nèi)源性氣體信號(hào)分子。本課題研究目的是探究硫化氫是否具有減輕腦缺血后tPA導(dǎo)致的腦出血的

2、作用。
　　方法：利用雄性 C57/BL6J小鼠，通過(guò)大腦中動(dòng)脈堵塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO），建立腦缺血模型。術(shù)前15分鐘腹腔注射葡萄糖（6 ml/kg,50％w/v）。缺血2小時(shí)，再灌注后，立即股靜脈注射tPA或生理鹽水（4 ml/kg），腹腔注射硫化氫供體或溶劑。小鼠隨機(jī)分為Sham組（假手術(shù)組），Control組（MCAO+saline+vehicle），tPA組（MCA

3、O+tPA+vehicle），tPA+NaHS組（MCAO+tPA+NaHS），tPA+ADT組（MCAO+tPA+ADT），tPA+ADT-OH組（MCAO+tPA+ADT-OH）。利用血紅蛋白檢測(cè)試劑盒，檢測(cè)MCAO后24小時(shí)腦中血紅蛋白含量變化；利用TTC（2,3,4-氯化三苯基四氮唑）染色的方法，檢測(cè)小鼠MCAO后1天及7天的腦梗死體積；利用檢測(cè)伊文思藍(lán)（evans blue，EB）滲透的方法，檢測(cè)血腦屏障破壞程度；利用稱(chēng)重法檢

4、測(cè)小鼠MCAO后24小時(shí)腦水腫程度；利用神經(jīng)功能評(píng)分、轉(zhuǎn)角實(shí)驗(yàn)以及轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MCAO后連續(xù)7天的小鼠神經(jīng)功能恢復(fù)情況；利用明膠酶譜的方法，檢測(cè) MMP-9活性變化；利用亞甲基藍(lán)方法，檢測(cè)小鼠血液H2S水平。
　　結(jié)果：與 Sham組及 Control組相比，tPA組小鼠缺血側(cè)腦半球組織中血紅蛋白（hemoglobin）含量明顯上升，證明腦缺血后tPA導(dǎo)致腦出血。H2S供體NaHS，ADT及ADT-OH減輕了tPA引起的腦出血。A

5、DT-OH減輕了缺血后tPA加劇的缺血側(cè)腦組織中伊文思藍(lán)（evans blue，EB）滲透及水腫的加重，證明H2S供體抑制了腦缺血后tPA對(duì)血腦屏障的破壞。根據(jù)MCAO后連續(xù)7天的神經(jīng)功能損傷評(píng)分（mNSS），轉(zhuǎn)角測(cè)試和轉(zhuǎn)棒實(shí)驗(yàn)的行為學(xué)測(cè)試，結(jié)果顯示，ADT-OH減輕了MCAO及tPA處理導(dǎo)致的小鼠神經(jīng)功能損傷。ADT-OH對(duì)MCAO及tPA處理后1天的梗死體積影響不大，但是減輕了MCAO及tPA處理后第7天tPA導(dǎo)致的梗死體積增加。明