硫化氫后處理對(duì)缺血心肌影響的研究.pdf

1、目的：采用成年大鼠心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧模型以及Langendorff離體灌注大鼠心肌缺血再灌注損傷模型，研究硫化氫(以NaHS為供體)后處理對(duì)缺血再灌注損傷大鼠心功能與結(jié)構(gòu)的影響，以探索其心肌保護(hù)作用的可能機(jī)制.
　　 方法：
　　 1.采用Langendorff裝置建立大鼠離體心肌缺血再灌注損傷模型，將SD大鼠隨機(jī)分為正常組(NOR)、缺血組(I/R)、缺血后處理組(Pcon)、硫化氫后處理組(NaHS1μM、10μM、1

2、00μM)、5.羥葵酸拮抗組(5HD)、HMR1098拮抗組(HMR1098)，每組8例。正常組：平衡灌注20分鐘后續(xù)灌100min；缺血組：平衡灌注20分鐘，灌注4℃ ST.Thomas停跳液，全心缺血40min，復(fù)灌60min；缺血后處理組：離體心臟平衡灌注20分鐘，全心缺血40分鐘，再灌注開始給予6次間隔有氧灌注10秒全心缺血10秒，續(xù)灌60分鐘；硫化氫后處理組：離體心臟平衡灌注20分鐘，全心缺血40分鐘，再灌注60分鐘，再灌注前

3、給予含各濃度NaHS的K-H液2分鐘；5-羥葵酸拮抗組：用藥前給予含5-羥葵酸的K-H液5min，余同NaHS10μM；HMR1098拮抗組：用藥前給予含HMR1098的K-H液5min，余同NaHs10μM.對(duì)比觀察(1)平衡末、再灌注15分鐘、30分鐘、45分鐘以及灌注末各時(shí)點(diǎn)的心功能指標(biāo)：心率(HR)、左室舒張末壓(LNEDP)、左室發(fā)展壓(NDP)、壓力瞬時(shí)最大變化率(dp/dtmax)；(2)平衡末、再灌注末取心肌組織并分離、

4、提取線粒體，氧電極分析各組心肌組織線粒體呼吸功能的交化。
　　 2.采用Langendorff裝置分離成年大鼠心肌細(xì)胞，將同批細(xì)胞隨機(jī)分為正常組(NOR)、缺氧組(H/R)、硫化氫后處理組(NaHS10μM)、缺氧后處理組(IPTC)、5HD拮抗組(5HD)、HMR1098拮抗組(HMR1098)。各組細(xì)胞復(fù)氧末在激光共聚焦顯微鏡下對(duì)比觀察(1)線粒體膜電位的變化；(2)F-肌動(dòng)蛋白的變化。
　　 結(jié)果：
　　

5、1.心功能指標(biāo)的變化：A.平衡末，心功能各項(xiàng)指標(biāo)各組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；B.與平衡末比較，再灌注后各組心功能均呈下降趨勢(shì)，以I/R組以及5HD組下降較為顯著(P<0.05)，而該兩組間無明顯差異；C.再灌注后NaHS1μM、NaHS10μM、NaHS100μM組與Pcon組比較，各組間心功能指標(biāo)無明顯差異(P>0.05)；D.應(yīng)用阻斷劑的兩組，以HMR1098組心功能各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)較為迅速，與NaHS10μM比較，其差異無統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但明顯優(yōu)于5HD組和I/R組(P<0.05).
　　 2.心肌組織線粒體呼吸功能的變化：各組平衡末呼吸控制率無顯著性差異(P>0.05)；硫化氫后處理組、缺血后處理組及HMR1098拮抗組再灌注末的呼吸控制率各組間無明顯差異，但明顯高于缺血組以及5HD拮抗組(P<0.05)，5HD拮抗組的RCR與缺血組比較，其差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 3.心肌細(xì)胞線粒體膜電位：與正常組膜電位相比

7、，復(fù)氧末H/R組、5HD組膜電位均顯著下降(P<0.05)；NaHS10μM、HMR1098組與IPTC組三組組間膜電位差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但HMR1098與5HD組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4心肌動(dòng)蛋白的變化：心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧后組間比較，正常組F-肌動(dòng)蛋白的熒光強(qiáng)度明顯弱于其余各組(P<0.05)；硫化氫后處理組以及缺氧后處理組熒光強(qiáng)度明顯高于缺氧組(P<0.05)；硫化氫后處理組與缺氧后處

8、理組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.三種濃度的硫化氫后處理均可模擬缺血后處理對(duì)離體灌注心臟的心功能產(chǎn)生一定的保護(hù)作用，且各濃度之間無量效關(guān)系；
　　 2.硫化氫后處理的作用位點(diǎn)可能是線粒體ATP敏感性鉀通道，與肌膜鉀通道無關(guān)；
　　 3.硫化氫后處理對(duì)缺血心肌保護(hù)作用的機(jī)制可能與穩(wěn)定心肌細(xì)胞線粒體膜電位進(jìn)而抑制凋亡，以及促進(jìn)F-肌動(dòng)蛋白聚集有關(guān)，同時(shí)也有助于線粒體呼吸功能的