銀屑病皮損間充質干細胞的生物學特性及其對HaCaT細胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的：
　　在體外分離、培養(yǎng)及鑒定銀屑病患者皮損和正常人皮膚來源的間充質干細胞( Mesenchymal stem cells，MSCs)，通過研究銀屑病患者皮損和正常人皮膚MSCs對HaCaT細胞凋亡的影響，進一步明確銀屑病患者皮損MSCs對角質形成細胞（Keratinocyte，KC）凋亡的作用，從而為銀屑病患者皮損KC的異常凋亡提供理論基礎，進一步揭示銀屑病可能的發(fā)病機制。
　　方法：
　　1.分別取自我院整形科

2、和泌尿外科手術切除的多余的新鮮皮膚組織和皮膚科門診臨床上已確診的銀屑病患者的皮損組織各8份，在體外無菌條件下進行真、表皮分離，培養(yǎng)真皮MSCs；2.采用流式細胞術對細胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、HLA-DR進行檢測；3.多向誘導分化及分化細胞的鑒定；4.將銀屑病患者組皮損及正常對照組皮膚的第5代MSCs分別與HaCaT細胞共培養(yǎng)，并設對照進行HaCaT細胞單獨培養(yǎng)，采用實時動態(tài)細胞分

3、析法檢測HaCaT細胞的增殖曲線；5.三組細胞培養(yǎng)72 h后，在流式細胞儀上利用Annexin-V/PI試劑盒分別檢測三組HaCaT細胞的凋亡率；6.銀屑病患者組皮損及正常對照組皮膚MSCs對HaCaT細胞凋亡率的影響采用方差分析及SNK檢測；7.銀屑病患者組HaCaT細胞的凋亡率與本病的皮損面積及嚴重程度評分兩者之間的相關性分析采用Pearson相關分析。
　　結果：
　　1.在倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病患者組皮損和正常對

4、照組皮膚MSCs的細胞形態(tài)相似，呈細長梭形；2.采用流式細胞儀檢測MSCs表面抗原，結果顯示細胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90、CD105呈高表達，而CD34、CD45及HLA-DR呈陰性表達；3.用脂肪細胞、成骨細胞、成軟骨細胞三種不同的誘導體系可將MSCs誘導分化為三種相應的細胞；4.實時動態(tài)細胞分析法檢測3組HaCaT細胞的增殖曲線在32~60h后開始出現(xiàn)不同程度的凋亡；5.共培養(yǎng)結果為：銀屑病患者組HaCaT細胞

5、凋亡率為（37.19?15.35）％，正常對照組HaCaT細胞凋亡率為（75.44?9.08）%，顯示了銀屑病患者組皮損及正常對照組皮膚MSCs均具有誘導或者抑制HaCaT細胞凋亡的能力（p<0.05）；6.兩組相比，銀屑病患者組皮損MSCs誘導HaCaT細胞凋亡的能力減弱或抑制HaCaT細胞凋亡的能力增加（p<0.05）；7.銀屑病患者組HaCaT細胞凋亡率與本病的皮損面積及嚴重程度評分兩者之間無相關性（p>0.05）。
　　結

6、論：
　　1.成功的在體外分離、培養(yǎng)及鑒定了銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs，進一步加強了培養(yǎng)MSCs方法的可靠性及有效性；2.銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs均具有誘導或者抑制HaCaT細胞凋亡的能力；3.銀屑病患者皮損MSCs誘導HaCaT細胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯減弱或者抑制HaCaT細胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯增加，表明銀屑病患者皮損MSCs可能誘導HaCaT細胞凋亡的能力減弱或者抑制Ha